基于脯氨酸理论提高枯草芽孢杆菌脂肪酶A的热稳定性.pdfVIP

亿 学 岛 生 物 互 程 ????，???．?????．?? 科学硼究田? ???????? ? ??????????????? ???：??．????／?．????．????～????．????．??．???? 基 于脯 氨酸 理 论 提 高 枯草 芽 孢 杆 菌? 脂 肪 酶 ? 的热 稳定 性? 李晓 彤?。江 凌? ，胡 赕?，朱丽英?。徐 娴? ??．南京 工业 大学 生物 与制 药工程 学 院 ，江 苏 南京 ??????；?．南京 工业 大学食 品与轻 工 学院 ，? 江 苏 南京 ??????；?．南京工 业大 学理 学院 ，江苏 南京 ???????? 摘? 要 ：以枯 草 芽孢 杆 菌 脂 肪 酶 ???????为研 究 对 象 ，根 据 从 ????数 据 库 中获 取 的 晶 体 结构 ，采 用 分 子 动 力 学模? 拟 和 分 子 生 物 学 实验 相 结合 的 方 法进 行 脂 肪 酶 热 稳 定 性 位 点 突 变 的 理 性 设 计 。首 先 ，利 用 分 子 动 力 学 模 拟 获 得 晶体 结? 构 中柔 性较 高 的 ????区域 ；进 而 ，结 合 “脯 氨 酸 理 论 ”，将 位 于 该 区域 附 近 的 ???残 基 突 变 为 ???，分 析 引入 ???突 变 对? ???? 热稳 定性 的影 响 ，筛选 得 到 ?????和 ??????两 个 突 变位 点 ；最后 ．通 过 定 点 突 变 操 作 对 突 变株 ?????。?和 ????? 进 行 热 稳 定 性 实验验 证 。 结 果 显 示 ，突 变株 ????? 、????。?。?的 比 活 力 分 别 是 野 生 型 ???? 的 ?．?倍 和 ?．?倍 ，??值? 分 别 提 高 了 ??℃ 和 ?℃ ，催 化 效 率 分 别提 高 了 ??? 和 ??％ 。? 关 键 词 ：枯 草 芽孢 杆 茵 脂 肪 酶 ?；分 子 动 力 学模 拟 ；脯 氨 酸 理论 ；定 点 突变 ；热 稳 定性? 中 图分 类 号 ：?????? 文 献 标 识 码 ：?? 文 章 编 号 ：????—????????????一????—??? 脂 肪 酶 ???????，???．?．?．??即三 酰基 甘 油 酰基? 脂 肪 酶 。正 是 由于 ???? 独 特 的分 子 结 构 ，使 其在 手? 水解 酶 ，是 一种特 殊 的酯键 水解 酶 ，可 以在 油水 界面 上? 性药 物 中间体拆 分领 域 具 有 巨大潜 力 ，已引起 广 泛关? 催化 油脂 的水解 反应 ，生成 脂肪 酸 和甘油 、甘 油单酯 或? 注??。。。然 而 ，???? 是 一 个 常 温 酶 ，最 适 温 度 仅 为 ??? 二酯 ???。脂 肪酶通 常被 用 于 在 非水 相 体 系 中催 化 油? ℃ ，野生型 的? ?? 在 ??℃下 的酶活 力仅 为最 适温 度? 脂及 其它 一些水 不 溶性 酯 类 的水 解 、醇 解 、酯 化 、转 酯? 下 的一半 ??¨。较 差 的 热 稳定 性 限制 了它 在工 业 生 产? 化 以及酯 类逆 向合 成 等反 应