精氨酸脱亚胺酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达及纯化.pdfVIP

第 ??卷 苇 ?期? 食 品 与 生 物 技 术 学 报? ??【．??? ??．?? ?????年 ? 月? ?????????????????????????????????????????? ???? ????? 文 章 编 号 ：?????一?????????????????—??? 精氨酸脱亚胺 酶基 因在大肠 杆菌中? 的 克 隆 、表 达 及 纯 化? 刘 咏梅? ，? 倪 晔? ，? 李 娜? ，? 李利 峰?。，? 孙 志 浩? ?? ??．江南 大学 工 业 生物技 术教 育部 重 点 实验 室，江 苏 无 锡 ??????；?．江 南大 学 生物 工 程 学 院 ，? 江 苏 无 锡 ???????? 摘? 要 ：通过 ???扩 增得 到 菌株 编码 ???的 ???? 基 因，并 构 建表 达 载 体 ??????—????。将 该 载? 体 导 入 大肠杆 菌 ??????????，获得 高效 表 达 ???基 因的重组 菌 。对 ???诱 导表 达 条件进 行优 化 ，? 结果 发现 宿主 菌在 ．??。达到 ?．?时加 入 ?．??????／??异 丙基? ?一硫代 半乳 糖 苷 ??????，在 ????? 诱 导 ???酶 活 最 高 ，为 ?．????／???发 酵 液 。经超 声 波破碎 、?????????????? 阴 离子 交换 层 析 、? ????????? ???凝胶 过 滤层 析 ，可获 得 ???????? 电泳 纯 重 组精 氨 酸 脱 亚 胺 酶 ??????。?????相? 对 分 子 质 量 大 小 为 ??????，由 两 个 相 同亚 基 组 成 ，纯 化 后 的 ????比 酶 活 达 ??．???／??。? 关键 词 ：精 氨酸脱 亚胺 酶 ；克 隆 ；表达 ；纯 化? 中图分 类 号 ：?????? 文献标 识 码 ：?? ???????，??????