HPLC法测定扶桑花中槲皮素的含量的论文.docVIP

　　HPLC法测定扶桑花中槲皮素的含量的论文 【摘要】 目的 建立扶桑花中槲皮素的含量测定方法。方法 采用hplc法，色谱柱为dikma platisil ods柱 (250 mm×4.6 mm, 5 μm)，流动相为甲醇0.5%磷酸水溶液(体积比30∶70)，流速1.0 ml·min-1，柱温 30 ℃，检测波长360 nm。结果 槲皮素进样量在0.041 6～0.416 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为98.95%，rsd为1.09%(n=6)。结论 该方法操作简便、快速、准确，可用于扶桑花药材的质量控制。 【关键词】 扶桑花;槲皮素;高效液相色谱法 　abstract:objective to develop a method for the determination of quercetin in flos hibisci rosaesinensis. methods hplc ed using a dikma platisil ods column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) ethanol0.5% phosphoric acid solution (30∶70) as mobile phase under a flol·min-1. the column temperature .results the calibration curve of quercein ethod is convenient, reproducible and accurate, and can be used in quality control of flos h. rosaesinensis. 　　key a platisil ods色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇0.5%磷酸水溶液(体积比30∶70)，流速1.0 ml·min-1，检测波长360 nm，柱温30 ℃，进样量20 μl。理论板数按槲皮素 计算 大于5 000，分离度大于1.5。色谱图见图1。 　　2.2 溶液的制备 　　2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成104 μg·ml-1的溶液，即得。 　　2.2.2 供试品溶液的制备 将扶桑花药材阴干，粉碎，过3号筛，取粉末约1 g，精密称定，加甲醇50 ml，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加20%盐酸15 ml溶解，加热回流1 h，迅速冷却，用石油醚萃取3次，每次15 ml，合并水相，蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至25 ml，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。 　　图1 对照品(a)和供试品(b)的高效液相色谱图 　　figure 1 hplc chromatograms of standard (a) and sample (b)2.3 线性关系考察 分别精密吸取标准品溶液0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 ml，置10 ml 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取20 μl，按“2.1”项下条件进样。以峰面积为纵坐标(y)，进样量(μg)为横坐标(x)绘制标准曲线，得回归方程：y=40969 x-1090.3，r=0.999 8。结果表明，槲皮素进样量在0.041 6～0.416 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。 　　2.4 精密度试验 精密吸取对照品溶液20 μl，连续进样5次，结果槲皮素峰面积的rsd为0.86%，表明仪器的精密度良好。 　　2.5 稳定性试验 精密吸取供试品溶液20 μl，分别于0、2、4、6、8、12 h进样分析。结果槲皮素峰面积的rsd为1.58%，表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。 　　2.6 重复性试验 精密称取同一批样品，按“2.2.2”项下方法平行制备供试品溶液5份，测定槲皮素含量，求得rsd为1.29%，重复性良好。 　　2.7 加样回收率试验 取扶桑花粉末约0.25 g，精密称定，分别加入一定量的槲皮素对照品，按“2.2.2”项下方法处理并测定槲皮素含量，平均回收率为98.95%，rsd为1.09%，见表2。 　　2.8 样品测定 取不同批次的样品，按“2.2.2”项下方法提取槲皮素，精密吸取供试品溶液20 μl，注入高效液相色谱仪，记录槲皮素的峰面积，采用外标法 计算 含量。结果见表3。表2 加样回收率试验结果表3 扶桑花中槲皮素的含量测定(n=3) 　 　3 讨论 　　3.1 本实验曾考察了不同质量分数(10%、20%、30%)的盐酸，在不同温度(80、90、100 ℃)下，水解不同的时间(0.5、1、1.5 h)的效果，结果表明用20%的盐酸，于90 ℃水解1