Ⅱ组代谢型谷氨酸受体阻断剂对老年痴呆大鼠模型脑内nNOS及nNOS mRNA表达的论文.docVIP

　　Ⅱ组代谢型谷氨酸受体阻断剂对老年痴呆大鼠模型脑内nNOS及nNOS mRNA表达的论文 【摘要】 目的 阐明ⅱ组代谢型谷氨酸受体（metabotropic glutamate receptor 2/3，mglur2/3）对老年性痴呆（ad）发病过程中一氧化氮（no）的影响。方法 应用免疫组化和原位杂交方法，观察脑室应用ⅱ组mglur2/3阻断剂α甲基(4四唑基苯)甘氨酸 (mtpg)对脑室β淀粉样肽（aβ）注射所致的ad大鼠神经型一氧化氮合酶（nnos）及其mrna表达的影响。48只sd大鼠随机分为假手术组、痴呆组、痴呆组+mtpg组，每组16只。各组大鼠均在morris水迷宫测试后常温饲养1 glur2/3阻断剂mtpg，可部分阻断ad引起的nnos表达增加，对神经元的形态也有恢复作用。原位杂交与免疫组化显示相似的变化趋势。结论 mglur2/3参与ad发病过程，no信号通路可能发挥重要作用。 【关键词】 脑室aβ注射；神经型一氧化氮合酶； 代谢型谷氨酸受体；α甲基(4四唑基苯)甘氨酸;sd大鼠 代谢型谷氨酸受体(metabotropic glutamate receptors，mglurs)是脑内广泛存在的、与g蛋白偶联的膜受体，参与脑内许多生理、病理过程。.研究证实， mglurs参与脑缺血耐受的发病机制〔1〕，并在老年性痴呆(ad)的发病中起一定作用。一氧化氮 (no) 作为非经典神经介质参与许多与谷氨酸受体激活相关的生理、病理过程〔2〕，如海马的长时程突触传递增强和小脑的长时程突触传递抑制、神经递质释放的调节、动物的学习和记忆〔3〕以及缺血耐受过程等〔4〕。本实验采用免疫组织化学和原位杂交方法，观察脑室应用ⅱ组mglur阻断剂α甲基(4四唑基苯)甘氨酸(mtpg)对ad发病过程中no的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物及分组 健康雄性sd大鼠48只，体重250～280 g（由河北医科大学实验动物中心提供)，随机分为假手术组、痴呆组和痴呆+mtpg组，每组16只。①假手术组：进行所有手术操作,注射等量蒸馏水。②痴呆组：于大鼠左侧脑室缓慢注入凝聚态β淀粉样肽（aβ2535） （浓度为4 g/l）5 μl；③痴呆+mtpg组：大鼠左侧脑室注入a β25～35后1 tpg 0.04 mg(mtpg溶于人工脑脊液)，其他两组均右侧脑室注入等量人工脑脊液。4 orris水迷宫检测，各组大鼠均于morris水迷宫测试后1 oh)溶于蒸馏水(蒸馏水有利于aβ25～35聚合)，浓度为4 g/l，在37℃保温箱中孵育4 d，使其变为凝聚态aβ。参照文献〔5〕的方法复制痴呆大鼠模型：大鼠在10%水合氯醛(350 mg/kg)腹腔麻醉下，固定于江湾1型c大鼠立体定位仪上，常规消毒，切皮，暴露前囟，依据大鼠脑立体定位图谱，于前囟后0.8 mm，中线左旁开1.5 mm，用牙科钻开颅，切开硬膜，用微量进样器自脑表面垂直进针4.0 mm (ap：-0.8 mm，ml：1.5 mm，dl：4.0 mm)，于左侧脑室缓慢注入凝聚态aβ25～35 5 μl，留针5 min，缓慢撤针；对照组动物经历同样的手术程序，注射等量蒸馏水。关闭切口，待动物清醒后，送回养笼，自由饮水，饮食。mtpg右侧脑室注射：方法同上，在ad建模后1 m，中线右旁开1.5 mm)，用牙科钻开颅，切开硬膜，用微量进样器自脑表面垂直进针4.0 mm (ap:-0.8 mm，ml:1.5 mm，dl:4.0 mm)，注射mtpg(4 mg/ml，溶于人工脑脊液)，每次注射mtpg 10 μl，1 min内注完，留针5 min；其他两组动物经历同样的手术过程，分别注射等体积的人工脑脊液；注射4 orris水迷宫测试。 　　1.3 morris水迷宫测试 大鼠空间学习记忆能力测试采用中国医学科学院研制的大鼠morris水迷宫装置。测试包括定向航行试验和空间探索试验。在水迷宫水槽壁上标明 4个入水点，将水槽等分为4个象限，逃避平台置于第三象限。水槽内充以洁净自来水，水面高出平台 2 cm,并加入适量奶粉使水浑浊,水温控制于（20±2）℃。实验前1 d将大鼠放入不含平台的水槽中2 min,使其适应迷宫环境及游泳。试验共7 d。前6 d进行定向航行试验将大鼠从入水点置入水槽中，记录60 s内大鼠从入水到爬上平台所需时间即潜伏期。每只大鼠每天训练4次,即从4个不同象限入水点入水进行训练各1次。训练中，若大鼠在60 s内找到平台,让其于平台上站立10 s；若未找到，用棒将其引上平台,并让其站立10 s,潜伏期记为60 s。第 7天进行空间探索试验：撤去平台，将大鼠从第二象限入水点放入水槽，记录60 s内其在平台象限(第三象限)的滞留时间。 　　1.