人纤溶酶原kringle区缺失突变体的毕赤酵母表达、产物纯化及鉴定的论文.docVIP

　　人纤溶酶原kringle区缺失突变体的毕赤酵母表达、产物纯化及鉴定的论文 作者：陈武，莫炜，张艳玲，宋钢，宋后燕 【摘要】 　　目的 研究人纤溶酶原 kringle 区缺失突变体(plgδk)的毕赤酵母(pichia pastoris)表达、产物纯化及理化性质鉴定。方法 采用7.5 l发酵罐对工程菌 plgδk/gs115 进行高密度培养、甲醇诱导表达，培液经离心、超滤、离子交换层析、凝胶滤过、透析后冷冻干燥。等电聚焦电泳、hplc、质谱分别检测 plgδk 等电点、纯度和分子量;纤维蛋白平板、肽底物s2403 分别测定plgδk 激活后的纤维蛋白和酰胺水解活性。 结果 7.5 l高密度发酵可获得约为400 mg/l培液的表达量，经三步纯化后制备的plgδk纯度大于96%。理化分析显示plgδk的等电点为7.5～7.8，分子量：27. 787 kd，比活性：23.6 u/mg。 结论 初步建立了plgδk的酵母高密度发酵及纯化工艺，所制备半成品活性与血浆提取的plg相近，具备放大生产和应用的潜力。 【关键词】 毕赤酵母 kringle 区 纤溶酶原 缺失突变体 纯化 abstract:objective to investigate the expression,purification and characters of the kringle domain delet