改良培养基对体外培养生精细胞增殖分化的影响.PDFVIP

安徽农业大学学报, 2014, 41(1): 14-19 Journal of Anhui Agricultural University 网络出版时间：2013-12-17 17:16:29 [URL] /kcms/detail/34.1162.S1716.032.html 改良培养基对体外培养生精细胞增殖分化的影响 宋小敏，姜 宏*，汪存利，黄 静 (解放军 105 医院生殖中心，合肥 230031) 摘 要：探讨改良培养基对体外培养小鼠生精细胞的增殖分化效应。根据培养基的不同分为：A 组（基础培养 液组）；B 组[基础培养液+胶质细胞神经营养因子（GDNF）+表皮生长因子(EGF)组]；C1、C2 和 C3 组[A 组+20%、 40%、80%睾丸液(TA)]；D1、D2 和 D3 组（B 组+20%、40%、80%TA）。采用上述 8 种培养基对 7~8 日龄小鼠生 精细胞进行体外培养，通过细胞形态学观察、细胞存活率和粗线期精母细胞特异性基因 P19、单倍体精子细胞特异 性基因 TP1 检测及染色体倍性分析，探讨 TA、GDNF 和 EGF 对小鼠体外培养生精细胞的增殖分化效应，结果如 下：（1）形态学观察表明，B 组生精细胞生长速度快，形态好，细胞集落多，A 组最差；C 组和 D 组细胞传代后 培养时间最长，可达 4 个月。（2）生精细胞存活率结果显示，培养 20 d 的 B 组细胞存活率显著高于其他各组（P＜ 0.05），C、D 组在各培养阶段与 A 组间无显著性差异。（3）TP1/P19 培养 15 d 后 B 组的 TP1/P19 显著高于其他各 组（P＜0.05），其他各组间均无显著性差异。（4）单倍体精子细胞比例结果表明，培养 15 d 后的 B 组单倍体细胞 比例显著高于其他各组（P＜0.05），其他各组间单倍体细胞比例均无显著性差异。GDNF 和 EGF 可显著提高生精 细胞体外培养的增殖分化效应，而睾丸液可显著延长生精细胞体外培养时间。 关键词：生精细胞；体外培养；GDNF；EGF 中图分类号：S865.13; Q953 文献标识码：A 文章编号：1672?352X (2014)01?0014?06 Proliferation and differentiation effects of modified culture medium on in vitro cultured spermatogenic cells in mice SONG Xiaomin, JIANG Hong, WANG Cunli, HUANG Jing (Reproductive Medicine Center, the 105th Hospital of PLA, Hefei 230031) Abstract: The aim of the study was to investigate the proliferation and differentiation potential of juvenile mouse testis spermatogenic cells in vitro under modified culture mediums. Based on the difference of culture