光学显微镜浅析.ppt

第一部分 形貌分析;第一章 光学显微镜; *数值孔径(NA) 数值孔径简写NA，数值孔径是物镜和聚光镜的主要技术参数，是判断两者（尤其对物镜而言）性能高低的重要标志。其数值的大小，分别标刻在物镜和聚光镜的外壳上。它是物镜前透镜与被检物体之间介质的折射率（n）和孔径角（u）半数的正弦之乘积。用公式表示如下： NA=nsin(u/2)。 它与分辨率成正比，与放大率成正比，与焦深成反比，NA值增大，视场宽度与工作距离都会相应地变小。 ;第一章 光学显微镜;第一章 光学显微镜;第一章 光学显微镜;第一章 光学显微镜;第三节 聚光系统;第三节 聚光系统;第四节 显微物镜;第四节 显微物镜;第四节 显微物镜;第四节 显微物镜;第四节 显微物镜;第五节 目镜;第六节 焦深和景深; *景 深 景深（depth of field??就是聚焦清晰的焦点前后“可接受的清晰区域”。这段距离的特点是实焦点后面清晰的距离要长于前面清晰的距离，对于任意口径来说，其焦点之后的景深大约是焦点前面景深的2倍。清晰范围前后较短的，我们一般称之为景深浅（或景深短）；而清晰范围较大的，我们一般称之为景深深（或景深长）。 ;第六节 焦深和景深; *焦 深 焦深为焦点深度的简称，即在使用显微镜时，当焦点对准某一物体时，不仅位于该点平面上的各点都可以看清楚，而且在此平面的上下一定厚度内，也能看得清楚，这个清楚部分的厚度就是焦深。焦深大, 可以看到被检物体的全层，而焦深小，则只能看到被检物体的一薄层。 ;景深与焦深示意图;第六节 焦深和景深;第七节 衬度增强机制;第七节 衬度增强机制;第七节 衬度增强机制;第七节 衬度增强机制;第七节 衬度增强机制;第七节 衬度增强机制 相衬显微镜*;* 相衬显微镜，又称相差显微镜： 相差显微镜（phasecontrast microscope）由P．Zernike于1932年发明，并因此获1953年诺贝尔物理奖。这种显微镜最大的特点是可以观察未经染色的标本和活细胞。 ? ? 相差显微镜的基本原理是，把透过标本的可见光的光程差（位相差）变成振幅差（光强差），从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。光线透过标本后发生折射，偏离了原来的光路，同时被延迟了1/4λ（波长），如果再增加或减少1/4λ，则光程差变为1/2λ，两束光合轴后干涉加强，振幅增大或减下，提高反差。在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处： ? ? 1.环形光阑（annular??diaphragm） 位于光源与聚光器之间，作用是使透过聚光器的光线形成空心光锥，焦聚到标本上。 ? ? 2.相位板（annular phaseplate）在物镜中加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ。分为两种： ? ? 1.A+相板：将直射光推迟1/4λ，两组光波合轴后光波相加，振幅加大，标本结构比周围介质更加变亮，形成亮反差（或称负反差）。 ? ? 2.B+相板：将衍射光推迟1/4λ，两组光线合轴后光波相减，振幅变小，形成暗反差（或称正反差），结构比周围介质更加变暗。;第七节 衬度增强机制 相衬显微镜 图像;第七节 衬度增强机制;* 偏光显微镜（polarizingmicroscope） 偏光显微镜是用于研究所谓透明与不透明各向异性材料的一种显微镜。凡具有双折射的物质，在偏光显微镜下就能分辨的清楚。 （1）偏光显微镜的特点 将普通光改变为偏振光进行镜检的方法，以鉴别某一物质是单折射（各向同行）或双折射性（各向异性）。双折射性是晶体的基本特性。因此，偏光显微镜被广泛地应用在矿物、化学等领域，在生物学和植物学也有应用。 （2）偏光显微镜的基本原理 偏光显微镜必须具备以下附件：起偏镜，检偏镜，补偿器或相位片，专用无应力物镜，旋转载物台等。偏光显微镜的原理比较复杂，主要是利用光的偏振性提高衬度。先用起偏器将入射光转变为偏振光。偏振光照到样品后偏振状态发生变化，然后通过检偏器观测，可以观测到样品的细节。为了调整光的偏振性，中间还需用到相位片或相位补偿器等。;第七节 衬度增强机制;第七节 衬度增强机制;第七节 衬度增强机制;第七节 衬度增强机制;第七节 衬度增强机制;第七节