分子生物学-6课件2.ppt

分子生物学;第七章 基因工程;第七章 基因工程;1 基因工程工具酶 ;1973年Smith和Nathans提出修饰一限制酶的命名法：取分离菌属名的第一个字母，种名的前两个字母，如有株名也取一个字母，当一个分离菌中不只一种酶时，以罗马数字表示分离出来的先后次序。修饰性甲基化酶标以M；限制酶标以R。例如，Smith等最初分离到的限制酶因是第2个分离出来的酶，应称为R·HindⅡ，但R通常都省略不写；相应的甲基化酶则为M·HindⅡ。又如，从大肠杆菌E.coil RY13中分离到的甲基化酶为M·EcoRⅠ，限制酶为EcoRⅠ 。限制酶的发现为切割基因提供了方便的工具，DNA重组才得以成为可能。 ;修饰一限制酶主要有三种类型： 类型Ⅰ酶为多亚基双功能酶，对DNA甲基化和切割由同一酶完成。该酶共有三种亚基，S亚基为识别亚基，识别位点分为两部分序列，中间隔以一定长度的任意碱基对。例如，EcoB识别序列为TGAN8TGCT，EcoK识别序列为AACN6GTGC。M亚基具有甲基化酶活性，R亚基具有限制酶活性，可在远离识别位点至少lkb以上处随机进行切割。 当类型Ⅰ酶特异结合在识别位点上时，如果两条链均已甲基化则不发生反应，对半甲基化DNA（即一条链甲基化，另一条链末甲基化），可使末甲基化的链甲基化，在识别位点上两条链均末甲基化，则DNA被酶切割。 由于切割是随机的，这类酶在基因操作中并无实际