河北地区人群骨桥蛋白基因多态性与冠心病的相关性的论文.docVIP

　　河北地区人群骨桥蛋白基因多态性与冠心病的相关性的论文 河北地区人群骨桥蛋白基因多态性与冠心病的相关性 【关键词】 骨桥蛋白;多态性;冠状动脉粥样硬化性心脏病;冠状动脉造影 【摘要】 目的探讨河北地区人群骨桥蛋白基因启动子-443t/c、-156delg/g和-66t/g三个多态性位点与冠心病发生之间的相关性。方法随机选择中国河北地区95例经冠状动脉造影检查并确诊为冠心病的患者及129例正常对照。提取外周血基因组dna，采取特异性引物对所选区域进行pcr扩增，将扩增产物进行测序后统计基因型和等位基因在病例组和对照组中的分布情况。结果-443t/c、-156delg/g两个snp位点在冠心病患者组与正常人对照组中分布无明显相关性(pgt;0.05)，而-66t/g位点在该地区不具备明显多态性。结论骨桥蛋白基因启动子区-443t/c、-156delg/g两个snp位点与冠心病发病无关。 【关键词】 骨桥蛋白;多态性;冠状动脉粥样硬化性心脏病;冠状动脉造影 　【abstract】objectiveto investigate the relationship betorphism sites (-443t/c, -156delg/g, -66t/g) in the gene of osteopontin promoter region.methods95 chd patients and 129 healthy volunteers ly selected from hospitals in hebei province.dna peripheral blood samples.the target segment plifieders.dna sequencing ed to detect the alleles.the distribution of genotypes and alleles in the torphism for -66t/c oter might not be related to the chd in hebei province. 　　【key orphism; coronary artery disease; coronary angiography 　　以往研究发现，骨桥蛋白(opn)可以促进血管平滑肌细胞的黏附和迁移，在动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄中具有重要作用〔1〕。.cOmopn基因启动子区有多个单核苷酸多态性(snp)位点，该基因启动子区的多态性对其基因的转录起着重要的调节作用〔2〕。然而，opn基因的snp位点与冠心病之间的关系尚不十分明确。因此本研究针对opn基因启动子区的三个可以调节opn基因表达的已知snp位点(-443t/c、-156delg/g和-66t/g)进行病例-对照分析，观察这三个snp位点与冠心病之间的关系，为探讨opn基因多态性在冠心病的预防、治疗中提供一定的遗传学基础。 　　1对象与方法 　　1.1对象冠心病患者随机取自河北医科大学第二医院于2007年4月至2008年12月在心内科的住院病人95例，其中男74人，女21人，年龄32~79〔平均(58.7±9.8)〕岁，所有病人均经冠状动脉造影检查并确诊为冠心病患者。对照组随机取自河北省直体检中心并经各科检查无异常的健康人129例，男64例，女65例，年龄22~78〔平均(42.8±14.2)〕岁。所有观察对象　　之间均无血缘关系。 　　1.2方法 　　1.2.1标本采集 　　所有研究对象(患者于冠脉造影前)均取晨间空腹外周静脉血，存于含有0.2 ml的2%乙二胺四乙酸二钾(edta-k2)采血管中，-70℃保存。 　　1.2.2基因组dna提取 　　使用血液基因组dna快速分离试剂盒(北京博大泰克生物公司)按使用说明提取血液标本中的基因组dna。1%琼脂糖凝胶电泳鉴定。并将提取的基因组dna保存于-70℃。 　　1.2.3pcr扩增及产物鉴定引物设计与合成按文献〔3〕所提供引物序列(上游：5′tgtcactagtgccatttgt3′，下游：5′tgtaccttggtcggcgtttg3′)由上海生工生物工程公司合成引物。反应体系：基因组dna模板(50 ng/μl) 9 μl，10×pcr反应缓冲液 6 μl，mgcl2 (25mmol/l)6 μl，taq dna聚合酶(5 u/μl)1.5 μl，dntp (10 mmol/l)1.5 μl，上下游引物(10 μmol/l)各3 μl，去离子高压灭菌水30 μl，总反应体系60 μl。反应条件：首先94℃预变性5 min，随后94℃变性30 s，58℃退火45 s，72℃延伸45 s共30个循环，之后72℃保持10 min。取pcr产物3 μl于1%