6徐莹2011 生物工艺学－6章节 育种子扩大培养.pptVIP

第六章 种子的扩大培养;种子扩大培养;是指将处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过摇瓶或扁瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。 ;;;;;（二） 种子扩培的目的;（三） 种子的要求：;二、 种子制备（Inoculum development）工艺举例;1、斜面 (谷氨酸生产菌AS1299);2. 一级种子（摇瓶）;3. 二级种子(种子罐);种子的质量要求：;（二）青霉素生产（丝状产黄青霉 ）的种子制备;1、斜面孢子;2、大米孢子;3、一级种子;种子的质量要求;三、 种子制备的技术概要;;（二）实验室阶段的种子培养 ;2、培养基选择的原则;3、起始接种物的传代问题;孢子制备是种子制备的开始，是发酵生产的一个重要环节。 孢子的质量、数量对以后菌丝的生长、繁殖和发酵产量都有明显的影响。 不同菌种的孢子制备工艺有不同的特点。;一般采用琼脂斜面培养基，培养基中含有一些适合产孢子的营养成分，如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。 碳源和氮源不要太丰富（碳源约为1％，氮源不超过0.5％），干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。 放线菌斜面的培养温度大多数为28℃，少数为37℃，培养时间为5～14天。;菌种;菌种接入种子罐有两种方法：;2）霉菌孢子的制备 ;3）细菌培养物的制备;（三）生产车间阶段;2、培养基选择的原则;例：柠檬酸发酵;以薯干粉为原料;3、种子罐级数的确定 ;;;;;4）对于生长快的细胞，种子用量的比例少，即需要的接种量少，所以相应的种子罐也少。 如谷氨酸生产中，摇瓶种子接入种子罐于32℃培养7～10h，菌体浓度达到108～109个/ml，即可作为种子接入发酵罐，这称为一级种子罐扩大培养，也可叫作二级发酵。;生长较慢的菌种，如青霉素生产菌，就需要二级种子罐扩大培养，也可称为三级发酵。 一般50m3发酵罐都采取三级发酵。 如果是实验室的中试（5～30L），可以通过直接孢子或菌体接入罐中发酵，即一级发酵。 ;4、接种量的确定; 由于种子量多，同时种子液中含有大量体外水解酶类，有利于对基质的利用，并且生产菌迅速占据整个培养环境，则可减少杂菌生长的机会。 但是???如果接种量过多，往往使菌丝生长过快，培养液黏度增加，造成溶解氧不足，而影响产物的合成。;;双种：两个种子罐接种到一个发酵罐中。;5、种龄;6、种子质量的判断：;（四）影响种子质量的因素 1 原材料质量（培养基） 培养基的营养成分应适合种子培养的需要； 生产过程中经常出现种子质量不稳定的现象，其主要原因是原材料质量波动。 起主要作用的是其中无机离子含量不同，如微量元素Mg2＋、Cu2＋、 Ba2十能刺激孢子的形成。磷含量太多或太少也会影响孢子的质量。 ;2 培养条件 （l）温度 温度对多数品种斜面孢子质量有显著的影响。温度高，菌丝过早自溶，效价降低等现象。严格控制。 （2）湿度 影响斜面孢子培养基上孢子的数量和质量。 （3）通气量 足够的通气量可以提高种子质量。;;;第二节 种子质量的控制措施 ;;名词解释：种子的扩大培养、接种量、倒种、双种、种龄 种子扩大培养的目的与要求。 保证种子质量有哪些措施？ 种子罐级数与发酵的关系。 思考题：结合具体的产品，谈谈种子质量控制的方法，以及种子质量对发酵的影响？