穿心莲内酯对巨噬细胞炎症因子表达的影响的论文.docVIP

　　穿心莲内酯对巨噬细胞炎症因子表达的影响的论文 作者：李明,陈伟强,胡太平,张丽蓉,蔡尤彪,古宏标 【摘要】 目的 研究穿心莲内酯对小鼠巨噬细胞氧化亚氮(no)、肿瘤坏死因子(tnfα)和白细胞介素6(il6)生成的影响。方法 培养小鼠巨噬细胞ral)和不同浓度的穿心莲内酯(终浓度1、10、50 μmol/l)进行干预，并设空白组和穿心莲内酯单独作用组作为对照。取培养24 h细胞上清，用griess法检测no产量;用elisa法检测tnfα、il6浓度。结果 与空白组比较，lps明显促进了ramation factors secretion in macrophage cells.methods a macrophage cell line ramatory factor nitric oxide (no),tumor necrosis factorα(tnfα) and interleukin6 (il6) in the supernatant easured by griess reagent and elisa,respectively.results after stimulated arkedly upregulated. pretreated mation factors expression levels,ight effectively blocks inflammation by doacrophage cells; inflammation factor; lipopolysaccharide 　　目前，炎症在心血管疾病、肿瘤中的促进作用日渐受到重视，抑制炎症反应防治心血管疾病及肿瘤成为研究的重点[1-2]。.cOm穿心莲为爵床科植物穿心莲属植物穿心莲干燥地上部分，作为常用中药，具有清热解毒、凉血消肿等功效。穿心莲内酯是穿心莲的主要药效成分，有研究表明，穿心莲内酯有显著的抗炎活性，能抑制二甲苯和醋酸所致的小鼠毛细血管通透性增加，还对大鼠蛋清蛋白、角叉菜胶足趾注射致炎模型有明显的抗炎作用[3]。炎症反应时，巨噬细胞在细菌及其内毒素的刺激下，分泌大量的炎症因子，如氧化亚氮(no)、tnfα和il1β等，这些炎症因子又可以进一步活化巨噬细胞，形成恶性循环，加重炎症反应。本研究通过观察穿心莲内酯对no、tnfα和il1β等炎症因子表达的影响，探讨其抗炎活性。 　 　1 材料与方法 　　1.1 试剂与仪器 　　穿心莲内酯(四川广汉市维康植化有限公司);细菌内毒素(lps，e coli serotype 055:b5，美国sigma公司);no检测试剂盒(南京建成生物公司);tnfα、il6 elisa检测试剂盒(美国rd公司);胎牛血清(杭州四季青公司);dmem培养基(美国gibco公司);酶标仪(美国biorad公司)。 　　1.2 细胞培养及干预实验 　　小鼠巨噬细胞raem培养基(含体积分数10%胎牛血清、质量浓度100 u/ml 青霉素和100 μg/ml链霉素)，体积分数5%co2，37 ℃条件下传代培养。取生长状态良好的raem培养基调整细胞浓度为1×106/ml，接种到24 孔培养板内，待细胞生长至80%融合后，加入不同浓度的穿心莲内酯(终浓度分别为1、10、50 μmol/l)孵育1 h，然后加入lps(终质量浓度1 μg/ml)进行刺激。实验分组：正常对照组、穿心莲内酯单独作用组、lps组和穿心莲内酯加lps组。 　　1.3 no浓度测定 　　细胞加入刺激物后培养24 h，收集各处理组细胞培养上清液，用硝酸还原酶法检测炎性介质no的浓度。操作步骤按试剂盒说明书完成。 　　1.4 细胞因子浓度测定 　　细胞加入刺激物后继续培养24 h，收集各处理组细胞培养上清液，用tnfα和il6 elisa试剂盒检测上清液中细胞因子的含量。操作步骤按试剂盒说明书完成。 　　1.5 统计分析 　　所有数据以±s表示，采用spss 11.0统计软件对实验结果进行student’s t检验，plt;0.05 为差异有显著性。 　 　2 结果 　　2.1 穿心莲内酯对lps诱导巨噬细胞no生成的影响 　　收集24 h细胞培养上清，用griess法测定细胞上清中no 的含量。结果见表1。结果显示，50 μmol/l穿心莲内酯单独作用并不影响巨噬细胞no的表达(与正常对照组比较，pgt;0.05);1 μg/ml lps刺激可以显著诱导巨噬细胞raol/l浓度范围内呈剂量依赖性。表1 穿心莲内酯对no分泌的影响 　　2.2 穿心莲内酯对lps诱导巨噬细胞tnfα、il6生成的影响 　　结果见表2。elisa检测结