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紫草多糖的体外抗氧化活性研究的论文.doc
紫草多糖的体外抗氧化活性研究的论文
作者:刘婷,陈韩飞,赵文彬,李德芳,王振华,郑秋生,陈韩英
【摘要】 目的研究紫草多糖的体外抗氧化作用。方法通过·oh 、dpph·、超氧阴离子、脂质过氧化及红细胞溶血反应体系,检测紫草多糖的抗氧化能力。均采用比色法测定。结果紫草多糖对·oh、dpph·、超氧阴离子、脂质过氧化及红细胞溶血均有清除或抑制作用。结论紫草多糖在体外具有抗氧化作用。
【关键词】 紫草;多糖;抗氧化
新疆紫草arnebia euchroma(royle)johns为紫草科软紫草属植物,又名新疆软紫草,收载于《中国药典》,是我国常用的中药[1],多为草本,以根入药,因其根皮暗紫色,故名“紫草”。该药具有凉血活血、解毒透疹之功效。已有研究表明紫草具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗炎及镇痛、抗肿瘤及免疫调节等生理活性[2]。现代医学证明,心脑血管疾病、衰老及肿瘤疾病的发生和发展与体内的活性氧自由基有密切关系,而许多抗氧化成分可以清除这些自由基,阻断由它们引发的体内脂质过氧化,能够预防上述疾病的发生发展近年来,人们发现天然药物是极有潜力的抗氧化剂资源,从中寻找新的抗氧化剂是现代医药和保健品行业的发展方向。.多糖是继黄酮类、多酚类、皂苷类及鞣质类之后从天然植物中发现的又一类抗氧化活性成分[3]。许多植物多糖对各种活性氧(reactive oxygen species,ros)具有清除作用,能减少脂质过氧化产物丙二醛(mda)的生成量,提高抗氧化酶活性(超氧化物歧化酶sod、谷胱甘肽过氧化物酶gshpx等),表现出多种途经的抗氧化作用[4,5]。 研究多糖及其衍生物的抗氧化活性,对于开发出更多更好的天然抗氧化剂,逐步取代存在一定毒性、致畸性和潜在致癌性的化学合成抗氧化剂,具有重要的现实意义[6]。本实验研究紫草多糖的体外抗氧化活性。
1 材料与仪器
1.1 药材与试剂紫草,购自新疆阿克苏地区,干燥粉碎过筛备用;1,1二苯基2苦肼基自由基(sigma公司);tris(北京拜尔迪生物公司);2硫代巴比妥酸(上海科丰化学试剂有限公司);焦性没食子酸(天津市富宇精细化工有限公司);其余试剂均为分析纯。
1.2 仪器多功能酶标仪(thermo 3001 varioskan flash);ar2140型万分之一电子天平(梅特勒托利多仪器有限公司制造);dl360超声波清洗机(浙江象山县石浦海天电子仪器厂)。
2 方法
2.1 紫草多糖的制备称取100 g紫草粗粉用600 ml的石油醚(30~60℃)脱脂3次,晾干,然后加入1 000 ml蒸馏水提取数小时,趁热过滤,重复3次。合并水提液并浓缩至原体积的1/4,加入3倍量无水乙醇,静置过夜后抽滤。将沉淀用无水乙醇、丙酮和乙醚依次洗涤,真空干燥,即得粗紫草多糖。
2.2 多糖对·oh的清除作用[7]
空白组:30 μl 0.75 mmol/l邻二氮菲溶液中加入60 μl 0.15 mol/l的pbs (ph=7.4),加入30 μl 的蒸馏水,充分混匀后,加入30 μl 0.75 mmol/l的硫酸亚铁,混匀后,再加入30 μl的1%的h2o2混匀。37 ℃的水浴中60 min后,在536 nm处,测定吸光度为a1;空白对照组:以30 μl 的蒸馏水代替h2o2重复上述操作,在536 nm处,测定吸光度为a2;样品组:以30 μl 的样品代替30 μl 的蒸馏水重复空白组操作,在536 nm处,测定吸光度为a3;样品对照组:60 μl 0.15 mol/l的pbs中加30 μl 的样品,充分混匀后,加入90 μl 的蒸馏水,在536 nm处测定吸光度为a4;空白参比组:60 μl 0.15 mol/l的pbs加入120 μl 的蒸馏水,在536 nm处测定吸光度为a5。清除率(%)=[(a3a4a1+a5)/(a2 a1)]×100%
2.3 多糖对dpph·的清除作用[8]
向100 μl dpph·乙醇溶液(浓度为0.2 mmol/l)中加入100 μl紫草多糖溶液。涡旋振荡器混匀,室温,避光放置30 min后,在517 nm处测定吸光度,平行测定3 次,并以相同浓度的维生素c作为阳性对照,计算清除率。
清除率(%)=[a0(a1a2)]/a0×100%式中:a0为dpph·溶液100 μl +无水乙醇100 μl的吸光度;a1为dpph·溶液100 μl +样品溶液100 μl的吸光度;a2为样品溶液100 μl +无水乙醇100 μl的吸光度。
2.4 多糖对超氧阴离子的清除作用[9]
取浓度为0.05 mol/l的trishcl(ph=8.2)缓冲液100 μl,25 ℃预热20 min,加入50 μ
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