动物胚胎移植技术和体外受精.pptVIP

第四章动物胚胎工程技术及体外受精 ;;现代生物技术;第一节 胚胎工程技术 胚胎移植 胚胎融合 胚胎分割 胚胎的冷冻保存 早期胚胎培养 胚细胞核移植;;一、胚胎移植;1.胚胎移植的生理学基础;2. 胚胎移植的基本原则;3、胚胎移植;1）供受体的选择与管理;受体的选择 身体健康，身体状况中上的适繁未孕个体，无生殖道疾病和难产病史 繁殖状况正常，有正常的发情周期 母性良好：泌乳性能、护仔性能 供、受的管理 防疫、记录 饲养管理等;2）、超数排卵;个体对超排处理的反应效果难以预测； 产生不良的后果：胚胎死亡 卵母细胞蛋白质合成过程发生改变 生殖道机能产生影响 ; 3）同期发情（synchronization of eatrus） 采用激素或类激素的药物处理，使这一群母畜在特定时间内集中发情和排卵。 即将母畜的黄体期延长或缩短，使母畜摆脱内、外孕激素对卵巢的控制，在同一时间内引起全部母畜的卵泡发育，从而达到同期发情的目的。;延长黄体期：孕激素 控制卵泡的生长发育和发情表现 缩短黄体期：前列腺素 加速黄体退化，使卵巢提前摆脱体内孕激素的控制 促进卵泡发育、排卵：促性腺激素 ;4）胚胎回收;;5）胚胎检查;;胚胎质量评价：;胚胎的降温：使胚胎停止发育，延长其体外生存时间 体外培养：将胚胎置于体温条件下，在培养液中，使其继续发育 胚胎冷冻：通过一定的处理程序，将胚胎降温冷冻后，保存于液氮中;胚胎冷冻的原理;受精卵移植 一般供体为良种或优良个体，而受体为生产性能较差的个体或品种。 “借劣质动物之腹怀优秀个体之胎”;;;;选择; 6)胚胎移植的应用范围;在家畜改良方面的应用;在特定品种扩繁上的应用;在动物生物多样性上的应用;其它方面应用;二、胚胎分割技术;2）胚胎分割的理论依据;2）.特点: 后代具有相同的遗传物质. 胚胎克隆. 3）.选择的胚胎: 发育良好的,形态正常的桑椹胚或囊胚. 4）.使用的主要仪器： 实体显微镜和显微操作仪 5）.应用: 为转基因技术、性别控制技术提供活胚材料 ;注意： ①对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要将内细胞团均等分割。 原因：内细胞团一般到囊胚阶段才出现，它是发育为胚胎本身的基础细胞，其他细胞为滋养细胞，只为胚胎和胎儿发育提供营养。若分割时不能将内细胞团均等分割，会出现含内细胞团多的部分正常发育的能力强，少的部分发育受阻或发育不良，甚至不能发育等问题。;②胚胎分割技术也是动物克隆的方法之一 ; 三、胚胎细胞核移植 将未着床的早期胚胎分散成单个的细胞，用电融合方法，使单个细胞与去除细胞核的未受精的成熟的卵母细胞融合。体外培养发育成胚胎后，移入受体妊娠产子。 已在小鼠、兔、山羊、牛、猴等动物上成功。;四、性别控制与胚胎性别鉴定; 早期胚胎的性别鉴定 1）、核型分析：分析部分胚胎细胞的染色体的组成 2）、SRY片段的PCR扩增;3）、H-Y抗原：雄性特异性弱组织相容性Y抗原 只有Y 精子才能表达H-Y抗原。 利用H-Y 抗体检测精子质膜上存在的H-Y抗原，再通过一定的分离程序，就能将精子分离成H-Y+(Y精子)和H-Y-(X精子)两类，将所需性别的精子进行人工受精，即可获得预期性别的后代。 测定胚胎上H-Y抗原的存在与否对胚胎的性别作出鉴定;意义;五、早期胚胎培养;体外受精(In Vitro Fertilization)是指哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术，英文简称为IVF。 在生物学中，把体外授精胚胎移植到母体后获得的动物称试管动物(test-tube animal)。 ;;一、基本原理：人工模拟体内环境（包括营养、温度、PH等），使初级卵母细胞成熟，同时使精子获能，最终完成受精作用，并有计划地保存胚胎;;;二、体外受精技术发展的历史 体外受精研究有100多年历史 1878年德国Sehenk在家兔和豚鼠进行了尝试 1954年张民觉获得首例体外受精兔 1963年金黄仓鼠体外受精获得成功，开创了精子体外获能成功的先例 1990年我国钱菊芬获得首例试管山羊 旭日干、范必勤等获得试管牛犊;三、意义;四、体外受精技术环节;体外受精;1．卵母细胞的获得与体外成熟;卵母细胞的采集;2）卵母细胞的成熟;（2） 细胞质的成熟;（3）细胞膜和透明带的成熟;2、体外获能;精子体外获能是体外受精技术的关键环节，主要包括精子的洗涤和添加特定成分 Brackett（1982）以高离子强度液处理使精子获能 钙离子在精子获能时起关键作用，能较快的诱发精子超活化运动和顶体反应。 氨基多糖（GAGs）是牛精子获能的主要物质，可促进对钙离子的吸收，诱