GB 4789.2-2010食品安全国家标准　食品微生物学检验　菌落总数测定.pdf

中华人民共和国国家标准 GB 4789.2—2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定 National food safety standard Food microbiological examination：Aerobic plate count 中华人民共和国卫生部 发布 2010-03-26 发布 2010-06-01 实施 食品伙伴网 GB 4789.2—2010 I 前 言 本标准代替GB/T 4789.2-2008《食品卫生微生物学检验 菌落总数测定》。 本标准与GB/T 4789.2-2008相比，主要修改如下： ——修改了标准的中英文名称； ——修改了菌落总数计算公式中的解释； ——修改了培养基和试剂； ——删除了第二法 菌落总数PetrifilmTM 测试片法。 本标准的附录A是规范性附录。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： ——GB 4789.2-1984、GB 4789.2-1994、GB/T 4789.2-2003、GB/T 4789.2-2008。 食品伙伴网 GB 4789.2—2010 1 食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定 1 范围 本标准规定了食品中菌落总数（Aerobic plate count）的测定方法。 本标准适用于食品中菌落总数的测定。 2 术语和定义 2.1 菌落总数 aerobic plate count 食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL） 检样中形成的微生物菌落总数。 3 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 3.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。 3.2 冰箱：2 ℃～5 ℃。 3.3 恒温水浴箱：46 ±1 ℃ ℃。 3.4 天平：感量为 0.1 g。 3.5 均质器。 3.6 振荡器。 3.7 无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。 3.8 无菌锥形瓶：容量 250 mL、500 mL。 3.9 无菌培养皿：直径 90 mm。 3.10 pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸。 3.11 放大镜或/和菌落计数器。 4 培养基和试剂 4.1 平板计数琼脂培养基：见附录 A 中 A.1。 4.2 磷酸盐缓冲液：见附录 A 中 A.2。 食品伙伴网 GB 4789.2—2010 2 4.3 无菌生理盐水：见附录 A 中 A.3。 5 检验程序 菌落总数的检验程序见图1。 图 1 菌落总数的检验程序 6 操作步骤 6.1 样品的稀释 6.1.1 固体和半固体样品：称取 25 g 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内， 8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有 225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均 质器拍打 1 min～2 min，制成 1:10 的样品匀液。 6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶 （瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成 1:10 的样品匀液。 36 ℃±1 ℃ 48 h±2 h 检 样 25 g(mL)样品+225 mL 稀释液，均质 10 倍系列稀释 选择 2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液， 各取 1 mL 分别加入无菌培养皿内 培 养 计数各平板菌落数 计算菌落总数 每皿中加入 15 mL～20 mL 平板计数琼脂培养基，混匀 报 告 食品伙伴网 GB 4789.2—2010 3 6.1.3 用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液 1 mL，沿管壁缓慢注于盛有 9 mL 稀释液的 无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混 合均匀，制成 1:100 的样品匀液。 6.1.4 按 6.1.3 操作程序，制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用 1 次 1 mL 无菌吸管 或吸头。 6.1.5 根据对样品污染状况的估计，选择 2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液）， 在进行 10 倍递增稀释时，吸取 1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸 取 1 mL 空白稀释液加入两个无