HILICRP连续二维系统的构建.pdfVIP

甀心连续二维系统的构建张维冰??铙菩?，刘翻??温?，李彤。，杜一平?实验条件第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集“齐齐哈尔大学，齐齐哈尔，???‘大连依利特分析仪器有限公司大连?关键词：亲水相互作用色谱，连续二维，???甊??嚯?亲水相互作用色谱法????员臼兰统蹩J蓟竦霉惴旱闹厥樱?⒁阎な凳且恢质视谟貌煌??碱特性且可电离的化合物的有效手段【?。随着蛋白质组学研究的开展，越来越多的蛋白质和多肽样品使用????蟹掷??，并显示出了较高的质谱检测灵敏度?。???褂眉?怨潭ㄏ啵?郧姿??样品保留较强，这与对疏水组分保留较强的使用非极性固定相的??具有良好的正交性。同时，???隦??褂盟?胗谢?芗磷魑O赐岩海?哂辛己玫募嫒菪裕?朔?艘酝??????反相模式中溶剂布匹配的缺点。因此，本文构建了???甊?????低场２⒎掷氲亩嚯难?罚?粤??二维正．反相模式进行了研究。多肽样品由????治觯?褂媒档陀谢?芗梁?康娜芗撂荻认赐选Ａ鞫?辔狝乙腈；????水溶液，流速???／??６嚯难?返腢???紫外可见光谱图见图??从图中可以看出，标准蛋白酶解后的多肽样品成分复杂，先出峰组分为疏水性较强的多肽，在???媳Ａ艚先酰??姿?宰榉直Ａ艚锨浚?龇逅承蚩亢螅?纬闪耸杷?宰榉趾颓姿?宰榉址肿?分离的现象。构建???甊?Ｊ侥芄桓纳魄姿?院褪杷?宰榉值谋Ａ簟Ｓ捎贖??使用极性阎定相，样品在固定相表面的富水层和流动相中分配，多数亲水组分能够进入富水层从而获得保留。多数疏水性组分由于不能进入极性固定相表面的疏水层而保留较弱。而?逯?斜Ａ粲際??正好相反，先流出的疏水组分进入?柱后，能够获得一定的保留，从而改善此部分溶剂的分离。多肽样品的???甊?Ｊ椒掷肴缤?所示。从图?锌梢钥闯觯??中较快流出的组分在???甊?Ｊ街谢竦昧私锨康谋Ａ簟Ｍ?保??着流动相中乙腈的含量降低到?％，?色谱柱保留的较多疏水性较强的组分。在???后溶剂梯度中，乙腈的含量逐渐升高到?％，所保留的疏水性组分被洗脱出来。多数组分都获得了较强的保留，分离状况获得了改善。因此，????连续二维正．反相模式，具有一定的正交性，改善复杂样品的保留，具有较强的分离能力。??高压恒流泉，???紫外一可见检测器，?????甦．???色谱柱以上仪器均来自大连依利特分析仪器有?甦．?．???蒑??公司提供。???超声仪???????，???甉????超纯水系统??????Ｒ译??????购自上海星可生化有限公司，磷酸二氢钾?治龃?购自上海凌峰化学试剂有限公司。多肽样品制备：称标准蛋白溶于?????????．?中，加入?皿??痬???芤?后，于??水溶液中变性取出。待样品冷却到室温，加入???小时，取出冷藏以终止酶解。将单独酶解的标准蛋白样品混合后，经???滤膜过滤后备用。其?瓸???6ɡ砉ご笱В?虾＃???????????????炕?，???工作站。?????限公司。??????痬?囊鹊鞍酌福???婷附?中牛血清白蛋白?．???⒙寻椎鞍?????⒀:斓鞍?????腿芫???????????????????瓾??’ 第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集?峁?胩致?参考文献图?嚯难?稨??柱分析梯度程序：??????????％?图????甊?????治?梯度程序：??．?．????????％?【?王嫒，路鑫，许国旺，色谱，??，???????．【?縏????【?縋???考『『?丽?????瓸???．????甅???，??，?：????????????芒、—墨璺∞∞??●，????甁．??甋?．??，?，??—????：寻?啊?瘢瑀??．?’．