大孔吸附树脂吸附纯化甘草酸工艺研究.ppt

制药1205 鞠鸣;甘草主要成分甘草酸 ( glycyrrhizic acid , GA)可以消炎解毒、 防治病毒性肝炎和高血脂症, 此外对癌症、 艾滋病也有显著疗效. 本试验探讨了几种大孔吸附树脂对甘草酸粗品的纯化效果，确定了甘草酸纯化的工艺参数。 ;1.1 材料与设备 甘草； 大孔吸附树脂（CAD-40、DM-130、 860021 ）；紫外可见分光光度计，电脑紫外检测仪；真空冷冻干燥机；高速冷冻离心机；酸度计; 甘草→粉碎→浸提→减压蒸馏→酸沉→离心、 水洗→甘草酸粗品→萃取、脱色→树脂吸附→洗脱→真空干燥→产品;1.3.1 原料预处理 将甘草切片烘干粉碎过 40 目筛，称取一定量甘草粉末， 加提取溶剂进行超声或微波处理， 再连续回流、 离心、 抽滤得甘草酸提取液， 将提取液减压浓缩至一定体积， 加浓盐酸调 pH2～3， 静置 12 h 后离心， 沉淀水洗 3 次， 真空冷冻干燥得甘草酸粗品。 再将甘草酸粗品用 70 %乙醇溶解、 脱色、 过滤， 配成一定浓度的甘草酸溶液， 作为上柱液。; 准确称取预处理后 5 g (湿基) 的 CAD-40、 DM-130、 860021 吸附剂于 100 mL 锥形瓶中，分别加入准确量取的 50 mL 甘草酸粗提物。在 20 ℃、 105 r/min 的恒温水浴振荡器中振荡，每隔 1 h 测定滤液中残余甘草酸浓度， 计算各种吸附剂对甘草酸的饱和吸附量; 1.3.3.1 径高比试验 配制一定浓度的甘草酸粗提物， 在加样量相同的情况下， 改变层析柱 （Ф2×30 cm ） 不同高度进行动态吸附， 每流出 3 mL 流出液测定甘草酸 1 次， 以流出液体积 （mL ） 为横坐标， 吸光度 （OD ） 为纵坐标， 确定最佳径高比;配制浓度为 7.0 mg/mL 的甘草酸粗提物， 以 1.0 mL/min 的吸附流速通过树脂柱，测定流出液中甘草酸的吸光度， 根据泄漏点来确定加样量; 准确量取 2.5 BV 体积的液体上柱， 使液面高于树脂界面 3 cm 左右， 以一定流速洗脱。测量流出液的吸光度值， 当吸光度达到甘草酸粗提物的 1/10 时， 停止上柱， 此时作为吸附泄漏点。 可以认为 CAD-40 对甘草酸的吸附达到饱和， 再用 2 BV～3 BV 的中性或弱碱性水洗， 洗脱速度控制在 0.8 mL/min， 用不同浓度的乙醇作为洗脱液，收集洗脱液并测定洗脱液的吸光度， 确定最佳的解吸剂浓度; 配制一定浓度的甘草酸粗提物， 在加样量相同的情况下， 选用不同的解吸流速进行洗脱， 考察解吸流速对甘草酸洗脱率的影响。; 可见， CAD-40 树脂的洗脱率最高， 其吸附量也最大； 因此， 选用 CAD-40 树脂为纯化甘草酸的树脂。分析原因， 主要是因为： 甘草酸为大分子， 孔径较大的树脂有利于其吸附； 洗脱率的大小主要取决于吸附剂与吸附质的作用力， 甘草酸具有多酚结构和糖甙链， 具有一定极性和亲水性， DM-130 和 860021 树脂是弱极性树脂， 吸附力强， 所以洗脱率偏低， CAD-40 树脂是非极性树脂， 洗脱率较高。 所以选择 CAD-40 树脂来纯化甘草酸;2.2.1 径高比对 CAD-40 树脂吸附效果的影响 可见， 树脂装柱太高、 太低都对洗脱不利， 考虑到工作效率， 选用径高比为 1∶10 来纯化甘草酸。; 可见， 当上样量达到 5.0 mL 时， 即吸附达到饱和。; 可见， 随着乙醇浓度的减小， 洗脱峰的峰值也随之下降， 拖尾现象也比较明显。 因此， 选用 95 %乙醇洗脱， 可达到纯化甘草酸的目的; 可见， 根据洗脱曲线的对称性可以看出， 流速为1.0 mL/min 时， 洗脱效果较好， 拖尾现象也不太明显。考虑到工作效率和吸附效果， 选用 1.0 mL/min 为洗脱流速; 1 ） 根据静态试验结果， 选出分离纯化甘草酸的最佳树脂分别是 CAD-40， 其吸附率是 90.91 %， 此时用95 %乙醇解吸， 解吸率可达 88.53 %; 2 ） CAD-40 大孔吸附树脂对甘草酸吸附最佳工作条件为： 层析柱 Ф2×30 cm， 上柱液浓度 7.0 mg/mL、 加样量 5.0 mL、装柱径高比 1∶10、然后用水洗去糖等杂质， 再用 95％乙醇作为解吸剂、 解吸流速为 1.0mL/min、乙醇体