健脾化瘀方对人肝癌细胞ras-MAPK通路的影响的论文.docVIP

　　健脾化瘀方对人肝癌细胞ras/MAPK通路的影响的论文 健脾化瘀方对人肝癌细胞ras/mapk通路的影响 【关键词】 健脾化瘀方；rtpcr；ras/mapk （声明：本站文章仅给需要的医务工作者提供交流学习参考。翰林医学免费提供。部分资源由工作人员网上搜索整理而成，如果您发现有哪部分资料侵害了您 的版权，请速与我们后台工作人员联系，我们将即时删除。客服qq后台 工作qq：928333977） 【摘要】 　　目的 研究健脾化瘀方对人肝癌细胞ras/mapk信号通路相关基因表达的影响。方法 采用rtpcr法，用凝胶电泳分析系统比较目的基因与βactin基因的吸光度比值来反映基因的表达。结果 erk、sos1、cfos基因表达降低(p＜0.05)， mek、raf、ras、grb2基因的表达未见明显差异(p＞0.05)。结论 健脾化瘀方能通过抑制ras/mapk信号通路的上erk、sos1、cfos的表达，从而起到抑制肝癌细胞的生长，诱导细胞凋亡的作用。 【关键词】 健脾化瘀方；rtpcr；ras/mapk 　　effect of jianpi huayu recipe on ras/mapk pathan hepatoma cell 　　zou xi,,nanjing university of tcm,nanjing jiangsu,china 210029) 　　【abstract】objective to study the effect of jianpi huayu recipe on ras/mapk signaling pathan hepatoma cell.methods the gene expression ethod and gel electrophoresis analysis system.results erk,sos1,cfos gene expression ek,raf,ras,grb2 gene expression.conclusion the jianpi huayu recipe can inhibits the groan hepatoma cell and induce the apoptosis by inhibiting the expression of gene erk,sos1,cfos of the ras/mapk signaling pathapk 　　细胞外刺激引起细胞反应是通过细胞内信号传导途径来实现的。.mapk是一类特殊细胞信号传导蛋白，经上游激酶作用后发生苏氨酸、丝氨酸双位点磷酸化而激活［1］。是信号从细胞表面传导到细胞核内部的重要传递者［2］，参与介导生长、发育、分裂、分化、死亡以及细胞间同步功能等多种细胞过程。该信号传导通路基本的信号传递步骤遵循mapks的三级酶促级联反应，该通路的激活可促进细胞增殖、抑制细胞凋亡［3］。mapk信号转导通路也被认为是许多信号通路的共同通道［4］。我们的前期实验研究表明，健脾化瘀方能明显抑制人肝癌细胞smmc7721的增殖，诱导人肝癌细胞的凋亡，因此，研究健脾化瘀方对人肝癌细胞ras/mapk信号通路相关基因表达的影响，是探索健脾化瘀方治疗肝癌机制的有效手段之一。本实验主要观察健脾化瘀方对ras/mapk信号传导通路上相关基因表达的影响。 　　资料与方法 　　1.细胞及药物 　　人肝癌细胞株smmc7721由南京中医药大学细胞实验室提供。中药制备：黄芪10 g、白术4 g、苡仁10 g、茵陈5 g、半枝莲5 g、重楼5 g、丹参5 g、郁金5 g、白芍5 g、全蝎1 g，共55 g，用550 ml蒸馏水加热回流提取2次，每次1小时，合并提取的药液，微波真空干燥。配制成相当于生药浓度1 g/ml的药液灭菌备用，实验时配制为6 mg/ml浓度。 　　2.实验方法 　　(1)细胞准备：取处于对数生长期的人肝癌细胞smmc7721，以5×105个/ml密度接种于直径6 cm的培养皿中，37℃、5%co2培养箱中培养24 h以使细胞贴壁，弃原培养液，加入健脾化瘀方终浓度为6 mg/ml的含10%小牛血清的dmem培养液，继续培养48 h后，用pbs洗2次，每皿加1 ml trizol，反复吹打后收集细胞于ep管中。立即使用或-70℃保存待用。以对数生长期肝癌细胞smmc7721为对照。 　　(2)rna制备：每皿1 ml trizol提取的细胞后，每ml加入200 μl氯仿，静置10 min后离心，取上清移至新ep管，加入等体积异丙醇，室温放置 10 min后离心，弃上清沉淀即总rna。每管加入1 ml 75%乙醇（用depc处理过的水配制），离心5 min