婴幼儿食品和乳品中牛磺酸的测定（单磺酰氯柱前衍生法）.PDF

北京东西分析仪器有限公司 婴幼儿食品和乳品中牛磺酸的测定 （单磺酰氯柱前衍生法） 一、方法提要 牛磺酸是一种结构简单的含硫氨基酸，在动物体内具有广泛的生物学活性， 化学名称为 2-氨基乙酸，牛磺酸主要存在于动物组织的细胞质中。牛磺酸不但 是我们体内需要的重要营养素之一，而且对婴儿大脑神经发育具有深远影响。人 类的肝脏是合成牛磺酸酸蛋白质的场所，但是体内合成的牛磺酸常不能满足婴儿 的生理需要，婴儿需要经常通过从外界摄取的渠道补充牛磺酸。 样品用水溶解，用亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白质。取上清液用丹磺酰氯衍 生反应，衍生物经 C18 反相色谱柱分离，用紫外检测器检测，外标法定量。 二、试剂及标准溶液配制 2.1 试剂 2.1.1 乙腈（CH3CN）：色谱纯 2.1.2 冰乙酸（CH3COOH）：分析纯 2.1.3 盐酸（HCl）：分析纯 2.1.4 无水碳酸钠（Na2CO3）：分析纯 2.1.5 亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6] ：分析纯 2.1.6 乙酸锌[Zn(CH3COO)2] ：分析纯 2.1.7 乙酸钠[Na(CH3COO)] ：分析纯 2.1.8 盐酸甲胺（甲胺盐酸盐）（CH3NH2·HCl）：分析纯 2.1.9 丹磺酰氯（5-二甲氨基萘-1-磺酰氯）：色谱纯 （注：丹磺酰氯对光和湿敏感不稳定） 2.1.10 牛磺酸标准品：纯度≥99% 2.1.11 盐酸（1 mol/L）：吸取 9 mL 盐酸，用水稀释并定容到 100 mL 2.1.12 沉淀剂 沉淀剂Ⅰ：称取 15.0 g 亚铁氰化钾，用水溶解并定容至 100 mL。该沉淀剂 在室温下 3 个月内稳定。 沉淀剂Ⅱ：称取 30.0 g 乙酸锌，用水溶解并定容至 100 mL。该沉淀剂在室 北京东西分析仪器有限公司 温下 3 个月内保持稳定。 2.1.13 碳酸钠缓冲液（pH 9.5）（80 mmol/L）：称取 0.424 g 无水碳酸钠，加 40 mL 水溶解，用 1 mol/L 盐酸调 pH 值至 9.5，用水定容至 50 mL。该 溶液在室温下 3 个月内稳定。 2.1.14 丹磺酰氯溶液（1.5 mg/mL）：称取 0.15 g 丹磺酰氯，用乙腈溶解并定 容至 100mL。临使用前配制。 2.1.15 盐酸甲胺溶液（20 mg/mL）：称取 2.0 g 盐酸甲胺，用水溶解并定容至 100 mL。该溶液在 4℃下 3 个月内稳定。 2.1.16 乙酸钠缓冲液（pH4.2）（10 mmol/L）：称取 0.820 g 乙酸钠，加 800 mL 水溶解，用冰乙酸调节 pH 值至 4.2，用水定容至 1000 mL，经 0.45 μ m 微孔滤膜过滤。 2.2 牛磺酸标准溶液的配制 2.2.1 牛磺酸标准储备溶液（1 mg/mL）：称取 0.1000 g 牛磺酸标准品用水溶解 并定容至 100 mL。储备液在 4℃下可保存 7 天。 2.2.2 牛磺酸标准工作液（紫外检测用）：将牛磺酸标准储备液（10.17.1）用水 稀释制备一系列标准溶液，标准系列浓度为：0、5、10、15、20 μg/mL。 临用前配制。 三、仪器及工作条件 3.1 仪器 3.1.1 LC 5500 高效液相色谱（HPLC）仪：配有紫外检测器（北东西分析仪器有 限公司）。 3.1.2 分析天平：感量为 0.0001 g（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。 3.1.3 超声波水浴（DS6150，Do-Chrom）。 3.1.4 涡旋混合器：（QL-901）。 3.1.5 离心机。 3.1.6 滤膜：0.45 μm。 3.2 色谱条件 色谱柱：C18 反相色谱柱（粒径