实验二基础培养基制作.PDF

兽医微生物实验指导 成大荣 5 实验二 基础培养基制作 课程名称：兽医微生物学 实验学时： 4学时 一、目的要求 1．掌握培养基制备的原理和一般培养基制备的原则和要求。 2．熟悉一般培养基制备的过程。 二、知识背景 培养基是指由人工方法配合而成的营养基质，专供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存菌种用的混 合营养物制品。培养基的种类很多，常用的在 1700 种以上，常以培养基的性状、成分、用途和性质来区 分。依培养基的组成成分，可分为天然培养基和合成培养基；依其性状有液体、半固体和固体之分（主要 取决于培养基中琼脂粉的含量多少）；根据不同的用途，培养基可分为基础培养基、增菌培养基、选择培 养基、鉴别培养基和厌氧培养基等。基础培养基如普通肉汤培养基和普通琼脂培养基，1％蛋白胨水培养 基等属于此类。增菌培养基对所要求的细菌有促生长作用，对杂菌有抑制作用，如亮绿胆盐-四硫磺酸钠肉 汤对沙门氏菌和志贺氏菌有增菌作用；选择性培养基含有抑菌剂（使不需要的杂菌不能生长繁殖），孔雀 绿、煌绿、胆盐、亚硒酸钠等都是可供选用的抑菌剂；鉴别培养基有一般鉴别培养基和选择性鉴别培养基 之分。用于区别不同微生物种类的培养基称为一般鉴别培养基，此类培养基中一般不加抑菌剂而只含指示 剂，如伊红-美蓝琼脂，三糖铁琼脂等，在培养基中加入某种抑制剂和指示剂，以抑制某些细菌生长，而促 进某种病原菌的繁殖，并使菌落具有一定特征，以助鉴别、分离，这类培养基称为选择性鉴别培养基。如 亚硫酸铋琼脂，其中含有葡萄糖、亚硫酸铋和煌绿，它们既是抑菌剂，又是指示剂，它们能抑制革兰氏阴 性菌和许多革兰氏阳性菌，对伤寒和副伤寒沙门氏菌均无影响，而且由于伤寒沙门氏菌能发酵葡萄糖，可 将亚硫酸钞还原成硫酸铋，形成黑色菌落，其周围有黑色环，对光观察可 见有金属光泽。 还有一些用于糖发酵和脱羧酶，脱氢酶试验的培养基，则是利用细菌特有的各种酶系统，能分解各种 特定的糖、醇或氨基酸而产酸、产气或产碱。用于细菌生化试验的培养基其特点是在无糖基础培养基中加 入某种特定的糖或某种特定的氨基酸，并以酚红或溴甲酚紫为指示剂，细菌在此培养基中的一系列生化反 应结果，均由指示剂的最终显色来判断。此类培养基属生化反应鉴别培养基。 厌氧培养基，专供厌氧菌的分离、培养和鉴别用的培养基。由于厌氧菌自身缺乏有氧代谢必备的各种 酶，如细胞色素和细胞色素氧化酶、过氧化氢酶和过氧化物酶以及超氧化物歧化酶，所以无法在有氧环境 下生长，必须制备营养丰富，氧化还原电势较低，具有特殊生长因子的专用培养基。通常用心、脑或其它 脏器浸液配制厌氧培养基，并向其中加入硫羟代乙酸钠（硫乙醇酸钠）、半胱氨酸、葡萄糖、肝块、肉渣、 还原铁等还原剂，也可在培养基的表面加灭菌液状石蜡。 培养基是依据细菌的物质代谢要求和营养需要而制备的，它必须含有细菌生长繁殖所需要的碳源、氮 源、矿物质以及生长环境条件，因此，在制作细菌培养基时，必须掌握如下原则和要求： （1）必须含有细菌生长所需的各种营养物质，如蛋白陈（提供氮源）、牛肉膏（提供碳源和其他含氮物 质以及矿物质）、盐类（维持渗透压的平衡和代谢之需要等）。 （2）培养基须含有适当的水分，因为细菌主要靠渗透、扩散和主动运输等方式进行细胞内外物质交换， 兽医微生物实验指导 成大荣 6 没有水是无法进行的。 （3）培养基应具有分离培养菌所要求的酸碱度（pH），有的为 pH5.6-6.8，多数为 pH7.2-7.6。 （4）制备培养基的容器不应含有抑制细菌生长的物质存在，不宜用铁铝容器，常用玻璃烧杯、搪瓷缸等。 （5）制备的培养基应均质透明，便于观察细菌生长性状和引起培养基的变化，液体培养基灭菌后应无沉 淀物。 （6）制备好的培养基应彻底灭菌，不得含有任何活的细菌、霉菌及其芽胞和孢子。最好用前 37℃培养 24-48h，无杂菌生长时方可应用。 三、实验材料 1．器皿量杯（1000mL 和 500mL 各