杂交狼尾草分子标记分析DNA快速提取方法-重庆大学学报.PDF

2007年 1月 重庆 大学 学报 (自然科 学版 ) Jan．2007 第 3O卷 第 1期 Edition) Science University(Natural Chongqing of Journal Vo1．3O No．1 文章编 号 ：1000—582X(2007)01—0126—03 杂交狼尾草分子 标记分析 DNA快速提 取方法’ 王凭青 ，吴明生，刘 博，唐 芳，李志中 (重庆 大学 生物 工程 学院，重庆 400030) 摘 要 ：以杂交狼尾草叶片为材料 ，用O．05NaOH溶 tool 液在 沸水 浴 中加热处理rain，进而用 10 pH3．0的 TE溶液进行 中和获得 DNA提取液 ，并用该 DNA提取 液为模板进行 RAPD—PCR和 SSR— PCR扩增．结果显示 ：用该方法提取的 DNA与常规 CTAB法提取 的 DNA质量相 当，可用于以 PCR技术 为基础的 DNA分子标记分析与 96孔板技术相结合 ，可以实现 DNA高通量提取． 关键词 ：杂交狼尾草 ；DNA提取 ；分子标记 中图分类号 ：Q943．2 文献标识码 ：A 分子 标记 辅助选择 se— assisted marker (molecular 水浴 中加热 rain，加热结束后10 每管 中加入mL 200 lection，MAS)依据与 目标基因紧密连锁的分子标记来 溶液 II(TE，pH3．0)，随即轻拍深孔板将溶液混匀，将 对 目标性状进行间接选择 ，它实现了育种从表型选择 其放人c【=冰箱中保存或直接用于 4 PCR扩增．同时对 到基因型选择的根本性转变，已广泛应用与植物新品 照组采用 CTAB 法进行 DNA提取． 种的选育上 ，大大促进 了作物育种进程 ?．然而分子 4)DNA质 量检 测．取 8 DNA提 取液 ，加上 育种工作量非常大 ，往往要对几百个乃至几千个后代 2 L上样 缓 冲液 混合 ，用0．8％的琼脂 糖 凝胶 (含 进行筛选分析 ，因此 ，如何快速、高效、高质量地提取适 1~g／mL溴化乙锭)电泳测定 DNA的质量． 合于 DNA分子标记分析的基因组 DNA就成为该项技 5)RAPD—PCR．在5O PCR管中依次加入10× 术能否推广和应用的关键．到目前为止，虽然 已经建立 PCR Buffer 2 L；25 mmol／MgCl2 1．6 L；10 mmol／L 很多植物基 因组 DNA提取方法 ，但大多需要液氮研磨 dNTPs0．4 ；5U／ Taq酶L 0．2 ；25 p．mol／L 10 或多步 提取 ，在制 备大批 量 样 品 DNA时仍 受 到 限 碱基引物 0．2 L；2 DNA提 取液 ，补水至 总体积 制L24】．针对 这些方 法缺 陷，笔者 在相关 研究 的基础 2O 2O L．PCR反应在 PTC一100扩增仪上进行．PCR反 上 ，以杂交狼尾草为材料 ，提出了一种适合分子标记分 应程序为：95 c【