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抗原修复:组织在制作过程中，由于化学试剂的作用封闭了抗原，又由于热的作用致使部分抗原的肽链发生扭曲，致使在免疫组化的染色过程中不能将其显示出来，为了解决上述问题，利用化学试剂（蛋白酶等）和热的作用将这些抗原重新暴露出来或修正过来的过程称为抗原修复。 细胞培养(cell culture)：是指从体内取出组织，分离细胞；或使用细胞系，在体外模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定的营养条件下，使之生存和生长，并维持其结构和功能特性。在体外条件下，模拟体内的生理环境，用培养液维持细胞生长与增殖的技术。 基因：是位于染色体上的遗传功能单位，是编码蛋白质（酶）或RNA的一段双链DNA片段。是控制生物性状的基本遗传单位。 侧向散射光：入射激光60度或90度角的散射光信号（角度指的是激光束照射方向与收集散射光信号的光电倍增管轴向方向之间大致所成的角度），主要用来获取有关细胞内部精细结构的颗粒性质的有关信息。 多克隆抗体：是指针对抗原上多个抗原决定簇产生的抗体，一般将抗原免疫动物后取血清直接制备。 分子生物学：在分子水平上研究生命现象的科学。通过研究生物大分子(核酸、蛋白质)的结构、功能和生物合成等，阐明各种生命现象本质的科学。 单克隆抗体：是指针对一种抗原决定簇产生的单一种类抗体，一般通过杂交瘤细胞技术制备。单抗的结构、氨基酸顺序、特异性等都是一致的，而且在培养过程中，只要没有编译，不同时间所分泌的抗体都能保持同样的结构与机能。 组织培养(Tissue culture)：把活体的一小片组织（O.5～1立方毫米）置于底物上孵育，细胞自其周围移出并生长。 生物材料的概念:生物材料用于人体组织和器官的诊断、修复或增进其功能的一类高技术材料，即用于取代、修复活组织的天然或人造材料，其作用药物不可替代。（生物材料能执行、增进或替换人体组织和器官因疾病、损伤等失去的某种功能，而不能恢复缺陷部位。） 器官培养(Organ culture)：将活体中整个器官或一部分器官取出，置于体外生存、生长并同时保持其一定的结构和功能特征。 细胞培养需要哪些基本条件？ 答：无菌条件： 无菌室的结构：一般由更衣间、缓冲间、操作间三部分组成。 2、（使用前）紫外照射3、每周甲醛熏蒸和每月新洁尔灭擦拭地面一次的方式进行消毒 超净工作台 常用培养器皿的清洗及消毒 火焰消毒：在无菌环境进行培养时，首先要点燃酒精灯。以后一切操作，如打开或封闭瓶口等，都需在火焰近处并经过烧灼进行。 消毒：压力蒸汽消毒器，电热干燥箱等。 大多数培养用液，如人工合成培养基、血清、酶液等均采用滤过法除菌。 细胞生长条件： 1 细胞的营养需要：碳水化合物、氨基酸和脂类三大类；也需要一定量的无机盐、维生素和微量元素。无机盐对调节细胞渗透压、某些酶的活性及溶液的酸碱度都是必须的。 细胞培养的常用液体：水，平衡盐溶液 ，pH调节液，消化液，抗生素溶液，培养基 完全培养基的组成：基础培养基 80％～95％，血清 5％～20％（注：血清解冻采用逐步解冻法），碳酸氢钠 2.0 g/L，青、链霉素 各100U／ml 2 细胞的生存环境 温度: 37 ℃ O2 CO2: 5% CO2 +H2O ← →H2CO3 ← →H+ + HCO3- pH: 7.2-7.4 渗透压 3 无污染 4 无毒 细胞检测条件： 细胞计数：计数结果以每毫升细胞数表示，细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同 血细胞计数器：手工计数细胞（注意：压线细胞只计左侧和上方的。） Coulter计数仪：人工计数 培养细胞活力测定：台盼蓝法活细胞不被染色，死细胞染成蓝色。 流式细胞仪细 胞活性指标通常包括细胞膜对核酸染料的通透性，代谢活性，膜电位等。 注意细胞培养的污染和检测。 细胞保存条件： 细胞深低温保存的基本原理是： 在－80℃以下时，细胞内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。 细胞低温保存的关键：在于通过0~20℃阶段的处理过程。在此温度范围内，水晶呈针状，极易招致细胞的严重损伤。 冻存和复苏的原则：慢冻快融，慢冻可使细胞内不致产生大的冰晶。 在细胞冻存时加入低温保护剂，能大大提高冻存效果。 细胞欲冷冻保存时，注意细胞浓度。 的规章制度，实验室应做好防火、防触电、防盗等工作。实验室安全：实验人员应严格遵守实验室有关 举例说明如何检测基因的表达？ 答：基因的表达包括基因的转录和翻译。其相对应的产物主要有mRNA，tRNA，蛋白质等， 假如我们需要测SPAG在人类睾丸中的表达研究，主要步骤如下： 按照实验目的等选取合适的材料，本例为成人睾丸，隐睾。 提取SPAG4L mRNA ，提取mRNA时注意防止RNA酶污染。 利用 RT-PC