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129生长激素生物活性的测定方法_中国药品检验标准操作规范2010年版
生长激素生物活性的测定方法
一、去垂体大白鼠体重法
1 实验材料及用具
1.1 天平 精度 0.01mg 供试品称量用
精度 1mg 试剂称量用
精度 0.1g 大鼠称重用
1.2 实验用具 手术板、注射器（1ml，精度0.01ml）、吸管、移液管、带塞玻璃小瓶、烧杯、玻璃棒、量筒、脱脂棉。
1.3 手术器械 手术剪、直镊、眼科剪、眼科直镊、眼科弯剪、牙科钻、钻头、抽滤瓶、真空泵、牙科刮勺、止血钳。
1.4 试剂 氯化钠、牛血清白蛋白、乌拉坦。
2 溶液配制
2.1 生理盐水 称取氯化钠适量，加水配成0.9%的溶液。
2.2 牛血清白蛋白的生理盐水溶液，称取牛血清白蛋白适量，加生理盐水配成0.1%的牛血清白蛋白的生理盐水溶液，简称溶媒。
2.3 乌拉坦溶液 称取乌拉坦适量，加生理盐水配成25%的乌拉坦溶液。
2.4 标准品溶液
2.4.1 实验当日，取生长激素标准品，放置至室温。
2.4.2 割开安瓶（注意勿使内容物损失）立即按标示效价精确加以定量溶媒将全部内容物洗出，使成1.0IU/ml的标准品溶液；亦可精密加入适量溶媒使溶解，混合均匀，精密吸取适量，用溶媒配制成1.0IU/ml的标准品溶液。
2.5 标准品稀释液
2.5.1 按《中国药典》附录生长激素生物检定法的要求，选择标准品高（dS2）、低（dS1）2组剂量及剂距。
2.5.2 计算2组剂量稀释液浓度及大鼠6天内皮下注射的总毫升数，一般高浓度稀释液可配成每1ml中含0.10~0.25IU（随季节、动物品系和来源不同），低浓度稀释液可配成每1ml中含0.025~0.06IU，高、低两浓度比值r=1:0.25，每鼠皮下注射每天0.5ml/次，连续6天，每组至少8只，例如：
高浓度稀释液dS2=0.1IU/ml×0.5ml/（天．鼠）×6天×8鼠/组=2.4IU/组，
即0.1IU/ml高浓度稀释液24ml
低浓度稀释液dS1=0.025IU/ml×0.5ml/（天．鼠）×6天×8鼠/组=0.6IU/组，
即0.025IU/ml低浓度稀释液24ml
2.5.3 精密量取1.0IU/ml标准品溶液适量，置50ml烧杯中，加入溶媒适量成标准品dS2稀释液（如0.1IU/ml）。
2.5.4 同法用dS2标准品稀释液（如0.1IU/ml）配制成低浓度稀释液dS1溶液。
2.6 供试品溶液 按生长激素供试品的标示效价或估计效价（AT）配制溶液。
2.6.1 粉末
2.6.1.1 取生长激素粉末，放置至室温。
2.6.1.2 迅速精密取适量，置带塞玻璃瓶中。
2.6.1.3 将称量的毫克数，乘以标示单位数，得总单位数。
2.6.1.4 精确加以定量的溶媒配成1.0IU/ml的供试品溶液。
2.6.1.5 精密量取上述溶液适量，同标准品溶液的释液方法，加溶媒生理盐水配成相应的高（dT2）、低（dT1）两浓度供试品溶液。
2.6.2 注射用粉针
2.6.2.1 取供试品放置至室温。
2.6.2.2 割开安瓶（注意勿使内容物损失）立即精确定量加溶媒将全部的内容物洗出，使成1.0IU/ml的供试品溶液。
2.6.2.3 精密量取上述溶液适量，同标准品溶液的释液方法，加溶媒配成相应的高、低两浓度供试品溶液。
2.6.2.4 将标准品和供试品高、低浓度稀释液按每天剂量分装入带塞玻璃瓶中并密封，置-15℃以下保存。
3 实验动物 同一来源、品系，出生26~28天，体重60~80g，同一性别、健康的大白鼠，试验前2~3周无菌条件下，25%乌拉坦溶液（0.3ml/100g鼠）腹腔注射麻醉，手术摘除脑垂体，迅速缝合，每只鼠编号记录体重，手术后于清洁级以上动物室饲养使其恢复，备用。
4 检查法
4.1 准备鼠盒，标明组别。
4.2 实验当日称量体重，剔除体重变化大于手术后一周时±10%的大白鼠。
4.3 选择体重合格大白鼠按体重随机分组，每组8只，每只鼠编号并记录体重，正常供给饲料及饮水。
4.4 每天临用时将配好的标准品或供试品稀释液在注射前取出融化，放置至室温。
4.5 按组别分别给以标准品或供试品高、低2种浓度稀释液，每鼠0.5ml，每天1次，连续6天，每天应该安排在相同的时间内注射，或分6次注射的间隔时间应接近。
4.6 皮下注射勿使药液溢出，每次注射要调换部位，如第一次给药自一侧颈部皮下进针，第二次，第三次在另一侧或中央进针，将药液注入不同部位，每次注射后清洁鼠盒。
4.7 最后一次注射后24!h，按给药次序脱颈处死大鼠。
4.8 称大鼠体重。
4.9 对可疑大鼠可进行尸检，切开蝶鞍区，肉眼检查有无垂体残留，剔除有垂体残存的动物。
5 实验结果计算
5.1 计算每只
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