《DNA的粗提取及鉴定》实验中的两个常见问题.docVIP

PAGE  PAGE 5 《DNA的粗提取和鑑定》實驗中的兩個常見問題 陶曉東（江蘇省常州市武進高級中學生物組 213161） 要點：實驗中提取DNA的實驗材料的選擇問題，幾種實驗材料各自的優缺點；DNA鑑定過程中容易出現的一些常見問題及具體的解決方案。 此實驗比較複雜，在實際操作過程中需要注意的細節問題也非常多，而且往往因為某個環節的操作不當，結果不能觀察到明顯的實驗現象。因此，有必要對實驗過程中應當注意的問題做一些探討。從我個人和學生的實際實驗操作過程中，我認為有以下兩個問題值得注意。 實驗材料的選擇問題： 雖然各種生物細胞中都含有大量的DNA，但是並不是每一種生物組織都適合做提取DNA的原材料。比較好的實驗材料最好應該滿足以下幾個條件 組織中DNA的含量比較豐富,能夠適合大量提取。 該組織中所含化合物種類應比較單純,避免由於其他物質化學性質與DNA相近，從而對實驗現象產生某些干擾。 實驗材料的價格適宜，從而能相對的降低實驗成本。 實驗材料在實驗過程中的可操作性較強，在相對簡單的條件下能大量提取出DNA，便於學生實驗操作。 可用於提取DNA的實驗材料很多，例如：雞血、植物組織（新鮮菜花、蒜黃、菠菜等）、魚類的精巢，甚至是從動物胸腺中提取DNA。這幾種實驗材料由於各自性質的差異，實驗的操作過程和步驟有很大的差別，以下是四種實驗材料特點的粗略比較。 實驗成本DNA含量特殊藥品配置實驗儀器配置實驗效果雞血細胞取材易，價格較低豐富檸檬酸鈉離心機 可操作性強，實驗效果明顯植物組織易取材，價格較低較豐富SDS (十二烷基磺酸鈉) EDTA (乙二胺四乙酸二鈉) 三羥甲基氨基甲烷常規實驗成功率較低，實驗效果與磨研液關係密切?，魚類精巢取材易，價格較低豐富無組織搗碎機可操作性強，效果明顯，但不易定量控制動物胸腺取材不易，價格高豐富檸檬酸鈉離心機 組織搗碎機可操作性較強，適宜做定量分析根據以上對比可以看出,???果從取材方面來考慮的話,以動物胸腺組織作為實驗材料是不經濟的,而且還要面臨中學實驗條件的限制等問題。我沒有具體完成過該實驗，如果有興趣的話，該實驗的實驗方法可查閱相關資料。 使用其餘三種物質作為實驗材料，學生的操作過程大同小異，具體資料可能會有一定的差別，以下是三種不同方法步驟的比較: 雞血細胞植物組織魚類精巢配質量濃度為0.1g/ml的檸檬酸鈉溶液,按1:2的比例與新鮮雞血混合攪拌均勻。 將血液倒入離心管中,在1000r/min的轉速下離心2~3分鐘,棄上部澄清液。 取離心管底部的血細胞液約5~10ml加入到100ml燒杯中，向燒杯中加入20ml蒸餾水，用玻棒沿一個方向快速攪拌5分鐘，加速血細胞在低滲溶液中的破裂。 將50ml 10%的氯化鈉溶液緩緩倒入燒杯中，用玻棒沿一個方向攪拌，此時DNA溶解於氯化鈉溶液中，濾除雜質，獲得粘稠狀的雞血細胞DNA提取液。 將雞血細胞DNA提取液置於較大的燒杯中，沿燒杯內壁緩緩倒入蒸餾水，並不斷攪拌，直到粘稠狀DNA不再析出為止。用玻棒攪拌，使析出的DNA纏繞於玻棒末端。為減少DNA的損失，可省略使用塑料紗布過濾這一步驟。 將析出的DNA再溶解於20ml 10%的氯化鈉溶液中。 在DNA的氯化鈉溶液中倒入95%的酒精50ml（冷卻過的酒精效果較好），使DNA再次析出，用玻棒攪拌，使DNA再次纏繞於玻棒末端。 DNA的鑑定：取兩支試管，各加入2ml 10%氯化鈉溶液，將DNA溶解于其中一支試管中，另一支做為對照組。然後，在兩支試管內加入相同的量的二苯胺試劑，水浴加熱10min左右，冷卻，觀察實驗現象。取新鮮植物組織（菜花）放置於冰箱中冷卻1~2天。 取30克植物組織,切碎,置於研體中,倒入10ml磨研液,充分磨研10分鐘。 將磨研液置於離心管中，在1000r/min的轉速下離心2~3分鐘，取上清夜置於冰箱中冷卻幾分鐘。 取1倍體積的上清液，加入2倍體積的95%的冷酒精當中，用玻棒輕輕攪拌，沉澱3~5分鐘後可見白色絮狀DNA纏繞於玻棒末端。 DNA的提純同雞血細胞為實驗材料的實驗操作步驟6、7，具體資料有一定的差異。 鑑定（略）。取成年雄性鯉魚1條，取出精巢10克，用組織搗碎機搗碎成糜。 組織糜溶於500ml 10%NaCl溶液中，用玻璃棒攪拌至凝膠狀。 取部分凝膠狀的DNA提取液進行DNA的提純，提純DNA的實驗過程同以雞血為實驗材料的實驗操作步驟6~7，具體資料有一定的差異。 鑑定（略）。從實驗的效果來看，使用魚類的精巢與使用雞血細胞沒有太大的區別，如果考慮實驗成本的話，兩者存在一定的差別。如果使用雞血細胞作為實驗材料，雞血細胞DNA提取液的儲備一定要充足，一般來說，每組學生（2人）需