章3高效液相色谱法.ppt.ppt

第三章 高效液相色谱法(HPLC);2;3;4; 高效液相色谱法是继气相色谱之后，70年代初期发展起来的一种以液体做流动相的新色谱技术.; ;高效液相色谱;三 、液相色谱分离原理及分类;四、液相色谱与气相色谱的比较;; 气相色谱仅能分析在操作温度下能气化而不分解的物质。对高沸点化合物、非挥发性物质、热不稳定化合物、离子型化合物及高聚物的分离、分析较为困难。使其应用受到一定程度的限制，据统计只有大约20%的有机物能用气相色谱分析；; ;②液相色谱固定相类型多,如离子交换色谱和排阻色 谱等，作为分析时选择余地大；而气相色谱是不 可能的。 ③ 液相色谱通常在室温下操作，较低的温度，一般 有利于色谱分离条件的选择。; 综上所述，高效液相色谱法具有高柱效、高选择性、分析速度快、灵敏度高、重复性好、应用范围广等优点。该法已成为现代分析技术的重要手段之一，目前在化学、化工、医药、生化、环保、农业等科学领域获得广泛的应用。;§3- 2影响色谱峰扩展及色谱分离的因素 （液相色谱速率理论）;1. ;3.离子交换色谱：固定相为离子交换树脂，流动相为无机酸或无机碱的水溶液。各种离子根据它们与树脂上的交换基团的交换能力的不同而得到分离。;5.离子色谱法：用离子交换树脂为固定相，电解质溶液为流动相，以电导检测器检测组分含量，用抑制柱消除强电解质背景离子对电导检测器的干扰。（与离子交换色谱法不同的是分离组分的检测器不同）;二、液一液分配色谱法（LLPC）;(1)担体(表面多孔型) 它是30～40μm的玻璃微球，表面附着一层厚度为1 ～ 2μm的多孔硅胶。由于固定相仅是表面很薄一层，因此，传质速度快，加之是直径很小的均匀球体，装填容易，重现性好，现已广泛使用！ 但表面积小，柱容量低，需用高灵敏度检测器。; ; 为了更好解决固定液在载体上流失问题。产生了化学键合固定相。 它是将各种不同有机基团通过化学反应键合到载体表面的一种方法，它代替了固定液的机械涂渍，因此它的产生对液相色谱法迅速发展起着重大作用，可以认为它的出现是液相色谱法的一个革命性突破。 是目前应用最广泛的一种固定相。据统计，约有3/4以上的分离问题是在化学键合固定相上进行的。; ;B 化学键合类型;（3）硅 碳型键合相;C 常见的化学键合固定相;; ; ;三、液一固吸附色谱法(LSAC); ; ; ; ;Ca2+;; ; ;五、离子色谱法（IC）; 为了解决这一问题，1975年Small等人提出一种能同时测定多种无机和有机离子的新技术。他们在离子交换分离柱后加一根抑制柱，抑制柱中装填与分离柱电荷相反的离子交换树脂。通过分离柱后的样品再经过抑制柱，使具有高背景电导的流动相转变成低背景电导的流动相。; 例如对于阴离子分析，色谱柱内为阴离子交换树脂，在流动相中，待测阴离子（如Br-）与阴离子交换树脂上的OH-离子交换：; 在阴离子分析中，最常见的洗脱液是NaOH ，洗脱过程中，OH-离子从分离柱的阴离子交换位置置换出待测阴离子Br-。当待测阴离子从柱中被洗脱下来进入检测器电导池时，要求能检测出洗脱液中电导的改变。但洗脱液中OH-离子的浓度要比试样中阴离子浓度大得多才能使色谱柱正常工作。因此，与洗脱液的电导值相比，由于试样离子进入洗脱液而引起的电导的改变非常小，因而，用电导检测器直接检测试样中离子的灵敏度极差。; 若在色谱柱中，设立一个抑制柱，抑制柱中装填与分离柱电荷相反的离子交换树脂。通过分离柱后的样品再经过抑制柱，使具有高背景电导的流动相转变成低背景电导的流动相。 上例分析中，若使分离后的洗脱液通过填充有高容量H+型阳离子交换树脂的抑制柱，则在抑制柱将发生如下反应：; 可见，从抑制柱中流出的洗脱液中，洗脱液（NaOH）已经变成电导很小的水，消除了本底的影响；试样阴离子则转变为相应的酸，由于H+的离子趟度很大，所以，大大提高了电导检测的灵敏度。;45;4、离子色谱法优点;六、离子对色谱法（IPC）;离子对分配机理： 离子对色谱的分离机理主要是离子对分配机理; 假如有一离子对色谱体系，固定相为非极性键合相，流动相为水溶液; 在流动相中加入一种电荷与待分离组分离子X+带相反的对离子Y-，则组分离子X+与对离子Y-首先形成离子对化合物X+ Y-，然后在固定相和流动相中分配：; 由于离子对化合物X+ Y-具有疏水性，因而被非极