阿霉素纳米粒对人白血病多药耐药细胞株 HL60-ADR多药耐药性的逆转影响的论文.docVIP

　　阿霉素纳米粒对人白血病多药耐药细胞株 HL60/ADR多药耐药性的逆转影响的论文 【关键词】 阿霉素；聚氰基丙烯酸异丁酯；纳米粒；多药耐药；逆转 肿瘤细胞产生药物耐受是导致临床化疗失败的主要原因，其中多药耐药(multidrug resistence,mdr)是肿瘤产生药物耐受的最重要机制[1]。化疗是治疗白血病的首选方法，白血病具有易复发和产生mdr的生物学特性，加强白血病mdr逆转研究具有重要意义。载体系统(微球、脂质体、纳米粒)逆转mdr是有效策略之一[24]，本实验以阿霉素聚氰基丙烯酸异丁酯纳米粒（adriamycinloaded polyisobutylcyanoacrylate nanoparticles adrpibcanp）逆转人白血病多药耐药细胞株hl60/adr的mdr，观察其逆转效果、研究其可能机制。 1 材料和方法 1.1 药物和试剂 阿霉素和mtt为sigma公司产品，rpmi1640培养基和小牛血清为gibco公司产品，其余试剂均为分析纯。 1.2 阿霉素纳米粒的制备 称取66.5 mgαibca单体（α氰基丙烯酸异丁酯单体）在电磁搅拌下缓缓滴入含阿霉素5 mg、5%葡萄糖、1%右旋糖酐70、0.5%柠檬酸的溶液中，室温下搅拌6 h完成乳液聚合作用，2 ml分装，除少量备检测，其余冷冻干燥36 h后封口，保存在4℃备用。.同法制备空白纳米粒(即不含阿霉素的纳米粒)。 1.3 纳米粒形态及粒径观测 取纳米粒3瓶，每瓶加蒸馏水2 ml,吹打分散，以3%磷钨酸负染后以透射电镜摄片观察形态并测量粒径及分布,每片计数测定200粒以上，数据行统计学分析。 1.4 包封率测定 取纳米粒两瓶，其一以dmso：h2o(3∶1)溶解后，以荧光分光光度法测量阿霉素488 nm处荧光值计为总药量(l,吹打分散，经低温高速离心（4℃、4 000转/分）2 h后分离上清液，同法测定游离药物量(l，10%小牛血清rpmi1640培养液中稳定生长。试验前两周换用无adr的rpmi1640培养液培养。 1.6 mtt法药物敏感实验 对数生长期肿瘤细胞悬液2×103·tt 25μl，37℃培养4 h后终止培养，小心吸弃上清液，每孔加150μl dmso，振荡10分钟使结晶物充分溶解。用酶标仪测od570。 抑制率=(1药物组od/对照组od)×100% 1.7 流式细胞术测定细胞内药物浓度 对数生长期肿瘤细胞悬液2×106个/ml，离心，pbs洗一次，用无血清的rpmi1640培养液悬浮，实验分三组，即阿霉素组、阿霉素纳米粒组和对照组，阿霉素组和阿霉素纳米粒组adr终浓度均为2 μmol/l，对照组不加adr。37℃温育1 h，然后洗去药物，台盼篮染色活细胞数大于97％。细胞过滤后，流式细胞仪测定细胞内阿霉素相对荧光强度（激发波长488 nm，发射波长575 nm），以阿霉素相对荧光强度代表阿霉素浓度。 1.8 统计学方法 两均数比较的t检验。 2 结果 2.1 形态及粒径观察 合成物透射电镜下呈球型,颗粒状，无粘连，平均粒径98.5±3.67 nm（图略）。 2.2 阿霉素包封率为95%。 2.3 mtt法药物敏感实验 空白纳米粒在高浓度时（100 μg/ml）可明显抑制肿瘤细胞增殖，在低浓度时（10 μg/ml）对肿瘤细胞增殖无抑制作用，说明纳米材料的细胞毒作用对mtt实验的影响可忽略不计。阿霉素纳米粒和阿霉素对hl60细胞细胞毒作用相似；而对于hl60/adr，在任何一个浓度点，阿霉素纳米粒较阿霉素毒性明显增强，其逆转倍数为ic50(adr)/ ic50(adrpibcanp)=2.63倍。 2.4 细胞内阿霉素浓度 阿霉素纳米粒组和阿霉素组，在hl60细胞内adr浓度相似（pgt;0.05）；而在hl60/adr细胞内，则阿霉素纳米粒组的adr浓度明显高于阿霉素组，约为阿霉素组的1.48倍。 3 讨论 纳米粒作为纳米级载体系统，可以有效保护药物、具有控制释放和靶向释药等特点，从而显著提高疗效，降低毒副作用而成为药学研究的热点之一。现阶段纳米粒在人体中吸收和药效学研究几乎空白，纳米粒的作用机制也有较多争议，所以进一步深入研究十分必要。由于纳米粒制备条件要求较高、尚未成为商品制剂等因素，在国内通常难以获得，从而影响了纳米研究的开展。 纳米粒的制备方法主要包括复乳法、吸附法、溶剂非溶剂法、乳化冷冻融化法[5]等。纳米材料的选择分为生物降解型如聚乳酸、聚乙醇酸、聚丙交酯、聚氰基丙烯酸烷酯等和非生物降解型如聚甲基丙烯酸甲酯、聚苯乙烯、聚酰胺等。由于生物降解材料在降解的同时伴随药物释放，而且其高分子材料在体内水解酶作用下最终生成水和二氧化碳，其应用较非生物降解型