骨髓单核细胞移植促进大鼠急性心肌梗死后局部血管新生的论文.docVIP

　　骨髓单核细胞移植促进大鼠急性心肌梗死后局部血管新生的论文 作者：盖玉生崔连群刘继东李锋刘尊奇 【摘要】本文通过探讨大鼠急性心肌梗死(ami)后骨髓单核细胞（bmmncs）移植对心功能和梗死局部血管新生的影响及其可能机制得出结论：大鼠ami1mncs移植可以增加梗死局部血管新生，进而改善心梗后心功能，其心功能改善及血管新生与bmmncs的横向转化无关。 【关键词】骨髓单核细胞细胞移植心肌梗死血管新生 本试验探讨了骨髓单核细胞(bmmncs)移植对急性心肌梗死(ami)后心功能的影响及其机制，旨在为老年ami患者bmmncs移植的临床应用提供实验依据。现报告如下： 1材料与方法 1.1实验动物及分组成年近交系i1h移植组10只，ami1mncs供体。 1.2动物模型建立3%戊巴比妥钠，腹腔麻醉，气管插管，呼吸机正压辅助呼吸，采取胸骨正中切口开胸，暴露心脏，剪开心包，在肺动脉圆锥与左心耳交界稍下1～2mm处用4-0无损伤线结扎左冠脉前降支,造成左室前壁mi。 1.3bmmncs的制备与标记移植前2h，取3只大鼠，断颈处死。无菌条件下取两后肢长骨，离心获取骨髓细胞，密度梯度离心法获取bmmncs并制成细胞悬液，dapi（sigma）染色40min，离心去除残留dapi，无血清l-dmem重悬细胞、计数，调整细胞密度为1×108/ml，转入1mlep管中，置于冰上保存(不超过1h)直至移植。 1.4心梗后bmmncs移植动物模型建立后，观察1h，直视下用微量注射器将已经过dapi标记的bmmncs（2×107个）（ami1h移植组）或ns（对照组）各0.2ml，多点注射至心肌梗死区中央和边缘处心肌层，ami1i1mncs（2×107个，0.2ml），术后常规预防感染。 1.5心功能检查分别于ami前、ami后8型取样测量左室舒张末内径(lvedd)，收缩末内径(lveds)，左室射血分数（lvef），左室短轴缩短率（lvfs）。所有数值均测量三个连续心动周期，然后取其平均值。 1.6组织学检查ami后8icro;m。 1.6.1移植细胞检测每块石蜡块间隔切片10张，紫外线作为激发光源，荧光显微镜下观察dapi标记的细胞。 1.6.2局部毛细血管密度测定切片进行he染色，普通光学显微镜下观察心肌梗死区域，10×40倍视野下随机计数5个视野的毛细血管数目，取其平均数作为这一切片心梗区域的毛细血管数目，按照同样方法计数同一心脏标本的所有其他组织切片（共15张）的毛细血管数目，再次取平均数，作为这个心脏标本心梗区域的毛细血管数目。 1.7统计学处理所有数据采用x-±s表示,组间两两采用t检验进行比较，检验水平为α=0.05。 2结果 2.1动物生存情况对照组死亡2只，ami1h移植组死亡2只，ami1mncs移植前后心功能ami前m超声检查结果显示，对照组、ami1h移植组及ami1i1h移植组与对照组比较，各项超声指标无差异；ami1i1h移植组，而与对照组相比，无显著差异，其lveds则显著低于其他两组，相应其lvfs及lvef显著高于对照组和ami1h移植组。 2.3移植细胞检测结果ami8i1h移植组梗死区域及mi1mncs的心脏标本切片中均未发现dapi标记的细胞。 2.4局部毛细血管密度测定对照组和ami1h移植组之间无统计学差异(p＞0.05)。ami1entis,etal.bonemarroyocardium[j].nature,2001,410(6829):701-5. [2]张少衡,葛均波,孙爱军等.纯化人源骨髓单克隆间充质细胞移植更利于梗死心脏功能恢复[j].中国介入心脏病学杂志,2005,13(3):149-53.