低叶绿素b水稻突变体类囊体膜的比较蛋白质组学.pdfVIP

生物化学与生物物理进展丹ogress in Biochemistry and Biophysics , 2006, 33(7): 653-659 nv-BE--··OMM"的归 Ftu 且 低叶绿素 b 水稻突变体类囊 体膜的比较蛋白质组学* 陈熙1)崔香菊1) YING-XIN ZHAOn 张炜1).. (1)南京农业大学生命科学学院生物化学与分子生物学系， 南京农业大学 -GE Healthcare Bioscìences 蛋白质组学合作示范实验室，南京 210095: 2)Dep翩翩 nt 0/ Chemistry, University 0/ Tennessee , Kno.仰胁， ηm996 ， USA) 摘要采用蓝绿温和胶凝胶电蚀(b lue-native polyacrylamide gel-elec衍。phoresis. BN). 以及改进的第二向 SDS幡PAGE 分离了水稻低叶绿索 b 突变体 ZH249-Y 和野生型 ZH249唰W 樊囊体膜蛋白复合物，系统比较了突变体和野生型各复合物亚基 的表达建异.结果显示，第一向日矶PAGE 分离了 PS I-L日CI 、 LHC 1 缺失的问 I 、 ATP 合成酶、细脑色素 b6仁 CP43 缺 失的 PSll2是 LHcn 六种复合物.上述各复合物纤。第二相 SDS-Urea分离后，利用股内酶解，商效辙相居析分肉肤段， 电喷雾串联质谱鉴定了复合物的亚基.结合免使印班研究，证明和野生型相比，突变体光系统 H 捕光天钱复合体的表达最适 度下降，但光系统 l 捕光天结破坏严重，间时光系统 H 核心蛋白和 ATP 合成酶的表达量上升.研究结果对揭示低时操素 b 水 稻突变体较高光化学效率和光稳定性的分子基础提供了线索，同时也表明，改进的 BN/SDS 唰PAGE 现向电泳不仅可以有效地 分离膜蛋白复合物及亚幕，也可以进行不同生理条件下，或野生型和突变体之间膜蛋白质细的比较研究， 关键词 蓝绿温和胶凝胶电泳，低叶绿索 b 突变体，水稻 (Oryzα 刚iva L.).类囊体膜，比较蛋白质组学 学科分类号 Q946 叶绿体类囊体膜是植物光合作用光反应的场 蘸绿油和胶凝胶电流 (blue-Native pol)响rylamide 所，光化学反应系统由类囊体膜上的多亚基遥自复 gel-electrophoresis, BN). BN唰 PAGE 以考玛 合物光系统 1 (PS 1) 及捕光天钱复合物 LHC 1 、 斯亮蓝。-250 代替 SDS 使蛋白质复合物带负电荷， 光系统 n (PS n) 捕光天线复合物 LHcn 、细胞色 用一蜡瓶和的去污剂如 dodecylmaltoside (DM), 素 b6f 和 ATP 合成酶组成.这些膜蛋白复合物的合 Triton X-I00 和毛地黄息戒 (di 自tonin) 等增榕膜蛋 成、组装及稳定性显著影响类囊体膜的结构与功能 白复合物，从而使复合物以近似天然的状态分离. 如垛叠程度、基粒数目以及光化学效率 [1] 回此研 这种方法后来用于各种生物膜，包括质膜阴、类囊 究这些复合物的结构与功能，对于认识类囊体膜稳