甘草酸对酸性环境中变异链球菌生长影响的体外研究的论文.docVIP

　　甘草酸对酸性环境中变异链球菌生长影响的体外研究的论文 [摘要] 目的 研究酸性环境中甘草酸对体外培养变异链球菌生长的影响。方法 在ph 7.0、ph 5.5和ph 4.0环境中培养变异链球菌，同时在培养基中加入3种浓度（0.78、1.57、3.13 mg·ml-1）的甘草酸，37 ℃下厌氧培养24 h后，测定各组的菌落计数和菌悬液吸光度值，分别以阴性对照组和ph 7.0组细菌生存率为对照，计算各组细菌的生存率。结果 以阴性对照组为对照，0.78、1.57和3.13 mg·ml-1甘草酸组在ph 5.5环境时细菌生存率为60.96%、60.27%和45.58%，在ph 4.0时细菌生存率为68.75%、53.12%和45.83%。以ph 7.0组为对照，0.78、1.57和3.13 mg·ml-1甘草酸组在ph 5.5和ph 4.0时细菌生存率分别为52.25%和39.05%、74.39%和43.11%、86.38%和55.30%。结论 在酸性环境中，甘草酸能够抑制体外变异链球菌的生长，环境酸度降低可使甘草酸的抑菌作用增强。 　　[关键词] 甘草酸； 变异链球菌； 耐酸性 　　[中图分类号] r 780.2 [文献标志码] a [doi] 10.3969/j.issn.1000-1182.2012.06.008 　　甘草是一种历史悠久的古老植物，甘草提取物及其主要活性成分甘草酸被广泛应用在食品、烟草和传统植物药中[1]。本课题组前期研究显示，甘草酸 　　（glycyrrhizic acid，ga）对体外中性环境中培养的变异链球菌（streptococcus mutans，s. mutans）的增殖和产酸均具有一定的抑制作用[2]。.cOm变异链球菌是一种在 　　牙菌斑中产酸快、耐酸性强的细菌，能够在牙菌斑的酸性环境中生存并产生致龋作用[3]。甘草酸对在酸 　　性环境中生长的变异链球菌有何影响，目前尚未见报道。本研究拟探讨甘草酸对体外酸性环境中培养的变异链球菌生长的影响。 　　1 材料和方法 　　1.1 主要材料与仪器 　　变异链球菌的国际标准株atcc 25175（四川大 　　学口腔疾病研究国家重点实验室提供），甘草酸a 　　（c42h62o16，纯度99%，宝鸡金森制药有限公司），dy- 　　2型厌氧培养箱（浙江义乌冷冻机总厂），hts 7000 　　plus全波长多功能酶标仪（thermo公司，美国），phs-3c精密ph计（上海雷兹仪器厂），millipore纯水仪（mil-lipore公司，美国）。所有实验用水均为去离子水。 　　1.2 细菌培养与菌液制备 　　将-80 ℃保存的变异链球菌接种于tpy琼脂平板，37 ℃厌氧（80%n2，10%h2，10%co2）培养24 h，镜检为纯菌后挑单菌落接种tpy液体培养基，37 ℃厌氧培养24 h，收集菌液，调节菌浓度，使在600 nm处测定的吸光度值a600为2.0，备用。 　　1.3 甘草酸药液配制 　　称取一定量甘草酸a加入tpy液体培养基中，滤过除菌后备用。 　　1.4 酸性环境中甘草酸对变异链球菌生长的影响 　　将实验组分为3组：甘草酸组1（ga1）、甘草酸 　　组2（ga2）、甘草酸组3（ga3），依次为在药液中加 　　入菌悬液（9∶1），使甘草酸的终浓度分别为0.78、1.57、 　　3.13 mg·ml-1。另设阴性对照组（ng），在tpy液体培 　　养基中加入菌悬液（9∶1）。各组的培养基又分为ph 　　7.0、ph 5.5和ph 4.0三种。 　　实验在96孔细胞培养板中进行，每组设6个平行孔，37 ℃厌氧培养24 h后，在600 nm处测定吸光度值a600；同时从每组平行孔中任选3孔，每孔分别取一定体积菌悬液接种于tpy琼脂平板（ph 7.0），37 ℃ 　　厌氧培养48 h，进行菌落计数（colony forming unit， 　　cfu），记为n值。 　　各实验组细菌生存率计算如下：以相同酸度中阴性对照组细菌生存率为100%，则药物组细菌生存率s药物=n甘草酸组/n阴性对照组×100%或s药物=a甘草酸组/a阴性对照组×100%。以相同药物组中ph 7.0组细菌生存率为100%，则低酸组的细菌生存率sph=n低酸组/nph 7.0×100%或sph= 　　a低酸组/aph 7.0×100%。 　　1.5 统计分析 　　采用spss 16.0软件进行统计分析，多组比较用方差检验，两组比较用t检验，plt;0.05为有统计学差异。 　　2 结果 　　2.1 酸性环境中甘草酸对变异链球菌生长的影响 　　各组的菌落计数和吸光度值见表1和2。从表中可以看出，以菌落计数和吸光度值为指标所反映的各组的变化趋势是基本一致的，相对而言菌落计数更准确地反应了活细菌