激光扫描共聚的焦显微镜在眼科研究中的应用.pdfVIP

· 58 · 中国体视学 图像分析 1998年 3月 第 3卷 第 l期 CHINESE JOURNAL OF STEREOLOGY AND IMAGE．-~NALYSIS Vol、3．No l Mar 1998 激光扫描共聚焦显微镜在眼科研究中的应用 王风翔 综述 何守志 审校 (解放军总医院眼科 北京 100853) 激光扫描共聚焦显微镜(Laser scanning confo— cal microscope，LSCM，是在普通荧光显微镜成像基 础上加了激光扫描装置 ，使用激光激发荧光探针 ，通 过计算机的图象处理得到细胞或组织内部细微结构 的荧光图像。它由激光 、荧光显微镜、荧光探测系统 和图像分析系统等组成 ，能利用荧光标记的信号观 察多种生理条件下的生物组织，而其中应用最广泛 的则是在培养的细胞或切开的整块组织中用免疫荧 光的办法标记蛋 白【l 3{2j。近年来 ，眼科研究 中广泛 应用 LSCM 技术 ，从而使这一领域中又多了一种新 的技术 ，本文 目的在于 回顾 M 在 眼科领 域 内的 应用情况 。 1 利用 LSCM 观察组织、细胞结构 1．1 晶状体：在眼组织中，应用 M 观察最 多的是晶状体。Bassnetl3．4j用 Rhodamin一123(线 粒体的特异性染料)和 thiazole orange分别着染线粒 体和细胞核，先后观察了大 白鼠和猴晶体胚胎发育 过程，以及成年鼠和猴晶体上皮细胞、纤维细胞中线 粒体与细胞核的分布及其变化，证实了线粒体与核 在晶体上皮细胞 、纤维细胞的分化过程中同步破坏、 消失的关系。1995年，Basnett[ 接着又用 LSCM 观察了用 DicC6及 Bodiphy—FL—Ceramide着染的 内质网和高尔基体在晶体上皮细胞分化 中的变化， 提示膜性细胞器特别是线粒体在晶体上皮细胞分化 过程中与核 同时消失的命 运。Merdes[ (1993)用 LSCM观察 了 phakinin和 filensin结 构上 的关 系。 SandilandsL (1995)通 过荧 光免疫 组化 (FITC和 Texax Red标记 抗体 )方 法，用 M 观 察 了 vi— mentin、Cp49、filensin三种中间丝 蛋白在晶体纤维 细胞分化和成熟过程中的分布及变化规律。 1．2 角膜：用 汇M 在活体上观察角膜外伤修复 过程 中细胞移行 及成纤 维细胞的 出现 ：Granna J (1992)利用 M 观察了放射性角膜切开(RK)术 后，角膜上皮及成纤维细胞中 f一肌动蛋 白、非肌性 肌凝蛋白、a—actinin、表面膜 a5、t3l—integrin和细胞 外 fibronectin(纤维结合素)等的分布及变化以及它 们在伤lZl收缩过程中的作用。Jester[ 也观察了 RK 手术 后 上 皮 细 胞 及 成 纤 维 细 胞 的 移 行 过 程。 Petrol{l0 为了进一步研究角膜伤 El收缩 的机理以 及微纤维束与伤 口闭合的关系，用 FITC—phaloidin 着染 F一肌动蛋白后，应用 M 观察并分析了在 角膜伤口愈合过程中张力纤维组织的时间的空间变 化。Jester{̈ j后来又用免疫组化荧光标记的方法， 以染料 FlTC、rhodamine观察到了a—SM(a一平滑肌 肌动蛋白)在角膜外伤伤 口收缩过程开始时的表达 及伤口愈合后(28—42天)的消失，a一平滑肌肌动 蛋白只在伤口部位由成纤维细胞单独表达 ，与伤 口 的收缩直接相关联，与 F一肌动蛋白不在同一地点 出现，证实了角膜上皮细胞在角膜外伤修复过程中 能转化成肌性成纤维细胞。 Ichijima{l2j等用 LSCM 观察了兔眼角膜机械性 擦伤和穿透性角膜冻伤后角膜 内皮 的修 复过程， FITC—phaloidin着 染 f一肌 动 蛋 白微丝 后 ，用 M观察不同损伤模型中的荧光特点 ，发现擦伤 区 f一肌动蛋白减少，这与体外的扩展(spreading)机 制相似，而冻伤区的荧光变化与之相反 ，与体外细胞 的迁移(migration)机制相似。而且冻伤表面有 2种 细胞，一种是含 f一肌动蛋白多的成纤维样细胞，胞 间通讯少 ，另一种是多边形细胞 ，提示擦伤与冻伤的 不同愈合机制。Ichijima{l3J也用 LSCM 观察了冻伤 角膜的愈合，用 phaloidin—FITC作为染料，发现在 其愈合过程中内皮细胞、上皮细胞 、变异的成纤维细 胞以及角膜基质细胞 中均有肌动蛋白微丝组织结 构。 1．3 视网膜：Breckler【̈j证实 了视 网膜色 素上皮 (RPE)中肌凝蛋 白的存在和分化，他用 M 观察 发现肌凝蛋白在牛、鱼眼 RPE中的广泛分布，并与 侧膜集中相联系，确认了