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10实验十 PCR基因扩增及PAGE电泳检测
实验十、 PCR基因扩增及PAGE电泳检测;一、实验目的;?二、实验原理?;5’
3’;;2.聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE(Polyacrylamide gel electrophoresis)是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成,同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联,从而形成三维网状结构。
在混合样品中各组分的迁移率主要取决于分子大小和形状以及所带电荷多少。;;三、仪器、材料与试剂;;;四、实验步骤:;;(三) 安装夹心式垂直板电泳槽:目前,夹心式 垂直板电泳槽有很多型号,虽然设置略有不同,但主要结构相同,且操作简单,不易泄漏。同学们可根据具体不同型号要求进行操作。
主要注意:安装前,胶条、玻板、槽子都要洁净干燥;勿用手接触灌胶面的玻璃。
玻板的清洗方法
抽真空、注胶及胶凝聚前注意事项;制胶、注胶;(四)样品处理及加样
一般加样体积为10-15uL如样品较稀,用微量注射器小心将样品通过缓冲液加到凝胶凹形样品槽底部,待所有凹形样品槽内都加了样品,即可开始电泳。;(五) 电泳
将直流稳压电泳仪开关打开,将电压调至1—8V/cm。当溴酚兰染料迁移至底部时,将电流调回到零,关闭电源。拔掉固定板,取出玻璃板,用刀片轻轻将一块玻璃撬开移去,在胶板一端切除一角作为标记,将胶板移至大培养皿中。;1.记录观察到的结果。
2.分析电泳条带的分布。
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