“细胞生物学”综合性实验项目申报表.docVIP

PAGE  PAGE 7  综合性、设计性实验项目指导书 《细胞生物学》 实验项目： 不同处理条件对植物细胞骨架的影响 龙岩学院 学院（系） 年 月 日 实验学时： 6 学时 实验类型：（综合、设计）设计 每组人数： 4 人／组 适用专业： 一、实验目的 通过本实验的学习，使学生了解在体外，温度、紫外线、化学性药物等对细胞骨架系统装配的影响，训练学生如何设计实验步骤来验证书本的知识点，使知识点掌握得更牢固，从而培养学生动手操作能力，独立思考问题，并通过查阅资料解决问题的能力，为今后遗传学的学习、毕业论文的完成等奠定基础。 二、实验原理 细胞骨架是指真核细胞中的蛋白纤维网架体系。狭义的细胞骨架指细胞质骨架，包括微丝、微管、中间纤维。一些细胞骨架系统的装配和去装配在时间和空间上是高度有序的，在体外，它们在温度、离子、化学药物等因素的作用下，可进行装配或去装配过程。 三、实验要求 实验前，学生必须先预习细胞骨架系统的组成，骨架系统在体外的装配条件等相关知识内容，查阅关于温度、紫外线、秋水仙素对体外细胞骨架系统装配的影响等资料文献，并写出具体的实验方案 四、主要仪器、试剂 显微镜、普通冰箱、低温冰箱、紫外灯、培养箱等 五、实验方案 （一） 考马斯亮蓝法显示细胞骨架 1、?蛋白质的细胞化学： （1）蛋白质是细胞中重要的结构和功能成分，某些染料能与蛋白质的氨基酸残基结合，产生颜色反应，借以对蛋白质进行显示。这种对蛋白质直接染色的细胞化学方法并不多，特异性也不强。 （2）目前，应用最广泛的方法是利用免疫标记技术对蛋白质进行特异性显示，通过荧光标记细胞骨架成分的单克隆抗体对细胞骨架蛋白进行显示。 2、?细胞中的细胞骨架成分： （1）、细胞骨架(cytoskeleton)，是细胞内以蛋白质纤维为主要成分的网络结构。其概念具有狭义和广义之分：狭义的细胞骨架是指细胞质骨架，根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不同包括微丝、微管和中间纤维；广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质。核骨架、核纤层与中间纤维在结构上相互连接，贯穿于细胞核和细胞质的网架体系。 （2）、细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用。本试验采用去垢剂TritonX-100 的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的膜结构和大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来，后者用考马斯亮蓝R250 染色，在光学显微镜下可见一种网状结构。 3、实验用品 (1) 材料 洋葱（或其他） (2) 器材 显微镜、载玻片、滴管、擦镜纸、PH 计 (3) 试剂 1. 0.01mol/L 磷酸盐缓冲生理盐水(PBS) 0.2mol/L Na2HPO4- NaH2PO4缓冲液（PB，PH7.3） 50ml 0.15mol/L NaCl 双蒸馏水加至1000ml 2. PB 0.2mol/L Na2HPO4 77ml 0.2mol/L NaH2PO4 23ml 3. M-缓冲液 咪唑(PH 6.7) 50mmol/L KCl 50mmol/L MgC12 0.5mmol/L EGTA 1mmol/L EDTA 0.1mmol/L 巯基乙醇 1mmol/L 甘油 4mmol/L 用1mol/L HCl 调pH 至7.2。 4. 1%的Triton X-100/M-缓冲液 5. 0.2%考马斯亮蓝R250 染液 甲醇 46.5ml 冰醋酸 7ml 蒸馏水 46.5ml 6. 3%戊