电转移中蛋白质的透膜现象及其对蛋白质印迹结果的影响.pdfVIP

； （ ） 生物化学与生物物理进展 · · 11 #% @ ’()*+,(-./0*+,(1.23* =.. !!!!!!!!!! !! 技术与方法 !! !!!!!!!!!! 电转移中蛋白质的透膜现象 及其对蛋白质印迹结果的影响 董 燕 张 枫 梅柱中 刘 斌 孙志贤# （军事医学科学院放射医学研究所，北京 ） !#$ 摘要 探讨了电转移中蛋白质的透膜现象及其对蛋白质印迹结果的影响 采用抗凋亡抑制蛋白 的抗体， % ’()*+*+, 对细胞裂解液进行蛋白质印迹 与常规操作方法不同之处是：在电转移的凝胶“三明治”中，重叠放置两张硝 % 酸纤维素膜 电转移后，对两张膜同时进行免疫印迹 在特定的转移条件下，两张膜的免疫印迹都出现了 % % 蛋白的特异印迹带，证实了电转移中存在着蛋白质的透膜现象 转移时间、电流强度和蛋白质的分子质 ’()*+*+, % 量，都是影响蛋白质透膜的相关因素 电转移中蛋白质的透膜，可以产生“印迹复制失真”的效应，从而最终 % 影响蛋白质印迹定性和定量的结果 所得实验结果和结论，揭示了蛋白质印迹技术方法学中一个需要加以充分 % 关注的问题，对于科学掌握和应用该技术具有积极作用 % 关键词 蛋白质，电转移，免疫印迹 学科分类号 -../0/1 蛋白质印迹（ ）技术结合了凝胶 小牛血清的 培养液体外培养） 23453),6785 !T !/. % 电泳高分辨率和免疫反应高灵敏度、高特异性的优 细胞裂解液的制备 !# 点，是蛋白质性质和功能分析研究的有效方法 按照文献［ ］方法略做改动：收集体外传代 %1 1 余年来，这一技术方法在生命科学研究领域中得到 培养的细胞，经 洗涤、离心后，弃上清液，