2009综合性实验：传代细胞培养及其增殖浅析.ppt

综合性实验：传代细胞培养及其增殖动力学检测;实验目的要求：;细胞培养;细胞培养条件; ;其它主要仪器设备： 4℃冰箱、数显恒温水浴锅、离心机、CO2 钢瓶、干燥箱、液氮罐等;; 1. 培养用品的清洗、包装和灭菌 清洗 玻璃器皿的清洗 步骤：浸泡→刷洗→浸酸→冲洗→ 干燥箱中烘干。 塑料器皿清洗 自来水充分浸泡→冲洗→2%NaOH浸泡过夜→自来水冲洗→2%~5%盐酸浸泡30min→自来水洗→去离子水洗→蒸馏水漂洗3次→晾干 包装 瓶类：铝箔纸罩以瓶口 大中小枪头盒：两层报纸包装 离心管、冻存管：铝箔纸罩以管口，两层报纸包装 金属器械（解剖工具）：装入饭盒，再以报纸包装 灭菌 蒸汽灭菌、 滤过除菌 、紫外线;; 3.无菌操作 无菌室定期清洗消毒一次。 所用物品要一次性准备好。 实验进行前，无菌室及超净工作台以紫外灯照射30分钟灭菌，以75 %乙醇擦拭无菌操作台面，并开启风扇运转3-5分钟后，才开始实验操作。 每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞。实验灭菌用品以75%乙醇擦拭后才带入工作台内。实验操作应在台面之中央无菌区域。 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。瓶口要用酒精火焰消毒，勿碰触移液器吸头部分或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。 ;传代细胞培养;传代培养的步骤： 1）将长满细胞的培养皿中原来的培养液弃去；加入新鲜的无血清培养液1ml轻轻冲洗细胞。 2）加入1ml0.25%胰蛋白酶溶液，使培养皿内的细胞都浸入溶液中。 3）将培养皿置于倒置显微镜下观察，随着时间的推移，细胞之间出现裂隙，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将胰蛋白酶吸出，加入2ml含血清1640培养液终止消化。 4）用移液器将贴壁的细胞轻轻反复吹打成细胞悬液，补充适量培养液后，分至2-3个培养皿中继续培养。 5）观察：细胞传代后，每天应对培养细胞进行观察，注意有无污染、培养液的颜色变化、细胞贴壁、生长情况。（短片）;体外培养细胞的生长过程;MTT法测定细胞增殖;MTT法测定细胞增殖;MTT法测定细胞增殖;创新性实验：市售保健品对Hela细胞增殖的影响;研究背景;;实验目的;实验材料和方法;实验方法： 1.保健品溶液的配制： 灵芝孢子粉的主要药理活性成分是灵芝粗多糖、三萜类灵芝酸、腺苷；螺旋藻的主要抗癌成分是β-胡萝卜素；蜂胶的主要成分是黄酮。大都不溶于水，因此选择75%乙醇作为溶剂；药物的作用浓度通过查阅资料获得经验值，并按照试验最高浓度的100倍配制成储备液。储备液经过滤除菌分装在EP管中。;;3.实验数据处理;;;实验数据处理样本（Excel绘制或手绘图表）