《嗜酸氧化亚铁硫杆菌及其活性的基因芯片检测方法》.docVIP

PAGE  PAGE 5 《嗜酸氧化亚铁硫杆菌及其活性的基因芯片检测方法》 国家标准编制说明 1、 工作简况 微生物冶金通过利用以矿物为能源的微生物的作用，氧化分解矿物使金属离子进入溶液，进一步分离、提取金属，具有流程短、成本低、环境友好和低污染等特点，特别是微生物冶金技术能处理低品位、复杂、难处理的矿产资源。低品位、复杂硫化矿微生物冶金速度慢、浸出率低是国际上未能解决的难题，而其根源在于缺少专属性、环境适应性好的菌种。 嗜酸氧化亚铁硫杆菌（以下简称A. f菌）属于原核生物门、细菌纲、硫化细菌科、硫杆菌属，革兰氏阴性,有鞭毛。该菌好氧嗜酸、化能自养, 能氧化金属硫化物，将Fe2+氧化成Fe3+，将还原态的硫氧化成S042＋，是生物冶金中最常用的菌种，同时也是研究最多的浸矿微生物和目前完成全基因组序列测定的唯一浸矿细菌。 A.f菌筛选过程冗长复杂，往往从采集几百份样品中分离纯化到的几百个菌中只能获得数十株A. f 菌，而从这数十株菌仅能筛选到几株高活性菌；同时，A. f 菌的筛选涉及的各种物理、化学和生物等非常复杂的因素。因此，A.f菌及其冶金性能的鉴别是生物冶金的一个难点。 利用传统的检测方法进行A.f菌及其冶金性能的鉴别存在工作量大、仅反映表现型（形态、生理、生化）或仅反映某一基因特征（常规的分子生物学方法）等缺陷，同时，它们很难在基因型与表现型之间建立连接。因此，必须发展新的检测技术。 基因芯片将成千上万个基因有序的排列在固体基片上，可以同时分析许多基因的表达情况及各种样本中不同基因的组成与变化情况。它具有高通量、高灵敏度、高自动化和快速、实时检测等优点。它能反映整体基因型特征并在基因型与表现型之间建立连接。而菌种的冶金性能是受基因控制的，因此，可以利用基因芯片技术对A.f菌及其性能进行鉴定。 中南大学资源加工与生物工程学院以王淀佐院士和邱冠周教授为学科带头人的团队在微生物冶金领域开展了长期研究工作，其研究方向有浸矿菌种的选育、浸矿微生物分子生物学、微生物浸出电化学机理、难处理金矿预处理工艺、硫化矿微生物浸出工艺和分离工程技术等。先后承担了10多项相关的国家级研究项目，主要包括： 微生物冶金的基础研究，国家重点基础研究发展计划（973计划） 硫化矿生物提取的基础研究，国家自然科学基金创新研究群体科学基金 冶金微生物功能基因组学研究，国家自然科学基金杰出青年基金 广东梅州低品位铜矿生物浸出-萃取电积产业化，国家发改委高技术产业化示范工程 铅锌硫化矿电位调控浮选，国家经贸委技术创新项目， 化学机械抛光纳米新材料制备技术及应用，科技部国际合作项目 硫化矿浸出专属菌种对原生矿浸出作用机理与实践研究，国家自然科学基金项目 铜锌硫化矿细菌浸出的微生物学机制研究，教育部高等院校博士点基金 低品位矿微生物浸出理论与实践研究，教育部高等院校博士点基金 在生物冶金相关领域目前已获得如下主要成果与奖励： 硫化矿电位调控浮选理论与实践，国家科技进步一等奖(J-210-1-02-R05)，2000年 低品位铜矿和锌矿复合催化剂和改良菌种生物浸出新技术，湖南省科技进步一等奖，2002年 我国铜矿生物提取专属菌种选育及提铜产业化应用，教育部中国高校十大科技进展，2002年 德兴低品位硫化铜矿细菌浸出提铜工业化实验研究，国家有色金属工业局科技进步二等奖（国色规字(1999)347-30），1999年 硫化矿浸出专属菌种的筛选和遗传改良技术，中国有色金属工业科技进步二等奖，2002年 专利：一种浸矿用菌种培育方法，专利号CN 1350058A 专利：锌矿石细菌浸出-萃取-电积提锌新工艺，专利号 CN 1360065A 2、 编制原则、主要技术指标确定依据 2.1. 筛选了大量不同活性的A.f 菌 从广西大厂、云南东川、思茅、广东大宝山、梅州、湖北大冶、江西德兴、甘肃白银、湖南浏阳其宝山等9个矿区采集的32份样品中分离得到了氧化亚铁硫杆菌32株。同时发现，不同A.f菌株在氧化活性和抗性等方面的差异导致其浸矿效果不同。共筛选到高活性菌5株，低活性菌5株，其它中等活性菌20株。 2.2. 通过国际合作获得了A.f菌全序列测定 2000年以来，中南大学和美国基因组研究所(The Institute of Genome Research,简称TIGR)合作进行了模式嗜酸氧化亚铁硫杆菌ATCC 23270的研究，通过全序列基因组测序鉴定出3217个基因。我们与TIGR达成共同使用该信息的协议。 2.3 构建了A.f 菌全基因组基因芯片 根据A.f菌全部3217个基因序列信息，应用合作单位美国橡树岭国家实验室的同事开发的设计探针，利用本实验室的生物芯片点样仪，通过接触式点样法制备了A.f 菌全基因组基因芯片。 2.4 从基因型分析确定A.