NogoA在脑缺血再灌注白质损伤中的表达及其意义.docVIP

　　NogoA在脑缺血再灌注白质损伤中的表达及其意义 作者：高晓玉 王得新 张拥波 【摘要】 目的 检测脑缺血再灌注后不同时间点轴突生长抑制因子NogoA在损伤白质区的基因表达，探讨NogoA与缺血再灌注白质损伤的可能关系。方法 制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注(MCAO)模型，实时定量聚合酶链反应方法(Relative Quantification PCR,RQPCR)检测各时间点NogoA在损伤白质区域的基因表达。结果 在损伤白质区域，NogoA基因表达在缺血再灌注1 d时表达量开始减少(与假手术组相比，Plt;0.05)，7 d时降至最低，14～21 d表达量开始上调，21 d时仍低于假手术组水平(与假手术组相比，Plt;0.001)。结论 缺血再灌注损伤后白质区域的NogoA基因表达呈现动态变化 规律 ，针对NogoA进行干预有望为缺血再灌注损伤后的脑保护 治疗 找到新的靶点。 【关键词】 脑缺血; NogoA;白质损伤 　　【Abstract】 Objective To study the expression of NogoA in cerebral atter after focal cerebral ischemiareperfusion(I/R) in rats, and explore the relationship betatter lesions after ischemia. Methods SpragueDaale rats iddle cerebral artery occlusion (MCAO). Relative quantification PCR(RQPCR) ed to examine the expressions of NogoA gene at different reperfusion time. Results The expression level of NogoA gene in the atter group),and group(Plt;0.001). Conclusions NogoA expreesion has dynamic changes in the atter after focal cerebral I/R. NogoA could be as one of the targets for neuroprotective therapy after cerebral ischemia. 　　【Key ia; NogoA; CAO)大鼠注射抗NogoA的单克隆抗体中和其作用,可以使轴突分支及树状棘的密度增加,即使给正常大鼠注射,也能产生短暂的轴突过度生长的现象〔6〕。这说明NogoA在一定程度上可以限制轴突再生。NogoA的发现,为中枢神经系统的损伤修复带来了新的希望。而目前有关NogoA与缺血再灌注白质损伤的关系并不清楚。本实验利用大鼠MCAO模型，观察再灌注损伤后NogoA基因在损伤白质区域表达的时空变化规律，以探讨NogoA与缺血性脑白质损伤的可能关系。 　　 1 材料与方法 　　1.1 动物 成年健康雄性Sprague Dain再灌流6、12 h、1、3、7、14、21 d组，每组6只，用于实时定量聚合酶链反应(RQPCR)的检测。另取6只作为假手术组，假手术组除插线长度为15 mm外，余步骤同实验组。参照Zea Longa 5分制评分标准〔8〕,待大鼠麻醉清醒后进行评分，剔除评分为0分或4分的大鼠。每组大鼠在规定的时间点取材，假手术组于手术后1 d取材。以10%水合氯醛(0.6 ml/kg)腹腔注射麻醉大鼠，立刻断头，冰上取右脑，切去距离额极、枕极各2 mm的脑组织，剩余部分分离出白质区域后液氮速冻后-80℃冻存，用于RQPCR检测。 　　1.3 RQPCR检测NogoA基因 用Prime 5.0软件设计引物,由大连宝生物公司合成。NogoA：F：CTGCTGCATCTGAGCCTGTGATA;R：AGGCAGCAGTTTCAAGCAGGA，扩增产物为126 bp。GAPDH为大连宝生物公司试剂，扩增产物为133 bp。引物设计后通过BLAST分析(.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST)避免扩增的序列存在非特异性，用oligo demo软件测试序列无引物二聚体形成。实验步骤如下：RNAprep动物组织总RNA提取试剂盒(Tiangen Biotech CO,LTD)提取总RNA，琼脂糖凝胶电泳，鉴定提取RNA质量，采用ProtoScriptTM第一链cDNA合成试剂盒( 购自Neaster mix 购自 Applied Biosystems，USA)：