胡萝卜愈伤组织的.docVIP

本科学生综合性实验报告 学号 074120219 姓名吕师留 学院 生命科学学院 专业、班级 07级应生A班 实验课程名称 植物组织培养实验 教师及职称 龙维彪 （讲师） 开课学期 2009 至 2010 学年 下 学期 填报时间 2010 年 5 月 11 日 云南师范大学教务处编印 实验设计方案 实验序号一实验名称胡萝卜愈伤组织的诱导培养实验时间2010.3.15-5.10实验室生物实验室1．实验目的 实验目的 1.1 通过本次实验，能够熟练准确配制MS培养基母液和常用试剂。 1.2.1通过本次实验，使大家熟练掌握外植体的表面消毒和无菌操作的技术。 1.2通过本次实验，为准备下次需要的培养基，需熟练掌握基本培养基和诱导培养基的配置方法。 1.3.1通过本次实验，使大家熟练掌握外植体的表面消毒和无菌操作的技术。 1.3.2通过本次实验，学会根据目的设计相应培养基的方法。 1.3.3通过本次实验，为准备下次需要的培养基，需熟练掌握增值培养基的配置方法。2． 实验原理、实验流程或装置示意图 2.1实验原理 Ⅰ：不论液体还是固体培养基，大多数植物组织培养中所用的培养基都是无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等几大类物质组成。 Ⅱ：配置培养基的最简单的方法是用市售培养基干粉溶解在蒸馏水中，加上蔗糖、琼脂和其它必要的附加物，最后加入蒸馏水使之达到最终的容积，调节pH值，高压灭菌，即配置成所需要的培养基。 Ⅲ：如果没有干粉，可采用以下两种方式来配制：1）按照配方规定的数量分别称量出各种成分，分别使它们溶解于水，然后再将它们混合在一起。2）先配制一系列的浓缩储备液（母液），储藏在2-4 ℃冰箱内，待配制培养基时取出，按稀释配用。 Ⅳ：植物细胞具有全能性。离体条件下，在适宜的培养基中，加入一定量的植物生长调节物，主要是细胞分裂素和生长素，使胡萝卜块根细胞脱分化形成愈伤组织。 Ⅴ:愈伤组织诱导成败的关键主要不是外植体的来源和种类而是培养条件，其中激素的种类和浓度更为重要。 Ⅵ:诱导愈伤组织常用的生长素是2,4—D，IAA,NAA等，常用的细胞分裂素是KT和6-BA。其中2,4—D常能在没有任何外源细胞外源细胞分裂素存在的情况下，十分有效地促进愈伤组织的增值，它使用浓度一般在10-7—10-5mol|L。 IAA,NAA，2,4—D等具有热稳定性，但IAA容易被光降解和被培养的组织中的酶氧化，因此，加在培养基中的IAA浓度应当较高（一般在1-30mg/L）,NAA不受IAA氧化酶的作用，可以在较低的浓度加在培养基中（一般在0.1-2.0mg/L） Ⅶ：NAA有利于单子叶植物的分化，而IBA诱导生根的效果最好，IBA和IAA广泛用于生根，并能与细胞分裂素互作促进芽的增值。2,4—D趋向于抑制植物形态的发生，故诱导再分化时就很少用它，一般多用NAA或IAA与一种细胞分裂素配合使用，低浓度的2,4—D往往有利于胚状体的分化。6-BA是细胞分裂素，细胞分裂素可促进细胞分裂和器官发生，延缓组织衰老，增强蛋白质的合成，抑制顶端优势，促进侧芽的生长及显著改变其它激素的作用。 Ⅷ：植物细胞具有全能性，离体条件下，在适宜的培养基中，加入一定的植物生长调节物，主要是细胞分裂素和生长素，使胡萝卜块根细胞脱分化形成愈伤组织。 Ⅸ：在教师的指导下配制不同浓度梯度的生长素和细胞分裂素的培养基，分别对胡萝卜块根进行培养，并进行观察对比分析，哪一种生长素与细胞分裂的浓度和配比，更适合于胡萝卜块根愈伤组织的诱导。 2.2实验流程 2.2.1MS基本培养基母液和常用试剂的配制 母液的配制大量元素母液的配制 微量元素母液的 配制 有机成分母液的配制 铁盐母液的配制 植物生长调节物质母液的配制其它常用试剂的配制 2.2.2胡萝卜愈伤组织诱导培养基的配制。 2.2.3胡萝卜愈伤组织的诱导。 2.2.4胡萝卜愈伤组织的继代培养。3．实验设备及材料 3.1实验仪器 冰箱、普通天平、分子天平、试剂瓶（棕色和白色）、量筒、烧杯、容量瓶、搪瓷杯、pH（5.4-7.0）试纸、药勺、称量纸、玻棒、标签纸、电炉、无菌操作台、酒精棉球、小块纱布、无菌滤纸、枪状镊子、手术剪、解剖刀、已灭菌的培养皿、酒精灯、50ml三角瓶、1000ml搪瓷碗、50ml量筒、10ml和5ml吸管、封