bFGF对关节软骨缺损的修复作用.docVIP

　　bFGF对关节软骨缺损的修复作用 作者：司全明 侯筱魁 毛宾尧 【摘要】 目的 观察碱性成纤维细胞生长因子对关节软骨缺损修复的 影响 。 方法 在兔双侧股骨髁间窝造成骨软骨缺损，一侧 应用 碱性成纤维细胞生长因子，另一侧作对照。术后3个月，利用组织切片及扫描电镜等方法，观察两侧骨软骨缺损修复情况。结果 修复3个月后，对照侧软骨缺损难以完全修复，修复细胞形态多样，似成纤维细胞，蛋白多糖颗粒较少。应用碱性成纤维细胞生长因子侧软骨缺损基本修复，修复细胞似软骨细胞，有较多的蛋白多糖颗粒与胶原纤维结合。缺损修复组织评分，碱性成纤维细胞生长因子组优于对照组。结论 碱性成纤维细胞生长因子可促进骨软骨缺损的修复。 【关键词】 碱性成纤维细胞生长因子 软骨缺损 修复 　　Effects of bFGF on Articular Cartilage Defect Abstract：Objective To explore the effect of basic fibroblast grour onths folloethods，such as transmission electron microscopy(TEM)，scanning electronic microscopy(SEM) ilar to fibrolblast cells.The amount of proteoglycan ilar to chondrocytes.The total scores on the histological grading scale ay be could improve the repair of cartilage defect. Key L/kg耳缘静脉注射麻醉。麻醉后，兔仰卧位，膝关节屈曲，小腿固定在自制的固定架上。双侧膝关节前方剪毛，常规消毒、铺巾。取髌韧带内侧切口，显露股骨髁间窝。在股骨髁间窝造成表面为4 mm×3 mm的骨软骨缺损。用0.25％氯霉素及生理盐水冲洗后，在bFGF组骨软骨缺损部，放入浸有bFGF(1 μg的bFGF溶于1 mL％透明质酸钠，Sigma公司)的明胶海绵一块，约4.5 mm×3.5 mm大小。对照组缺损部放同样大小仅浸有1％透明质酸钠的明胶海绵一块，无bFGF，缝合切口。术前1 h及术后3 d，肌注青霉素80万单位。动物放于笼中常规饲养，于术后4 d和8 d膝关节分别再注射一次，bFGF组注射1 μgbFGF(1 μg的bFGF溶于1 mL 1％透明质酸钠)，对照组膝关节注射透明质酸钠1 mL。术后3个月经耳缘静脉注射空气处死动物。取股骨髁标本进行扫描电镜及组织切片行形态学等观察。 　　1.2 组织切片光镜观察 　　bFGF组和对照组分别取8个标本，标本经磷酸缓冲液清洁，用40 g/L的多聚甲醛PBS固定48 h。修整标本后，在100 g/L的乙二胺四乙酸中脱钙。每周换液一次，利用针刺法确定脱钙情况，6～7周脱钙彻底后，于软骨缺损中部横行切断，每一标本分为2部分，一部分用于组织切片光镜观察，一部分用于扫描电镜观察。组织切片观察标本经流水冲洗后，乙醇逐级脱水透明，石蜡包埋，连续5 μm切片，常规HE染色，OlympusBH2显微镜下观察，并进行组织学评分。 　　1.3 扫描电镜观察 　　扫描电镜，标本置2％戊二醛磷酸缓冲液中固定24 h(4℃)，用10 g/L四氧化锇固定2 h，乙醇逐级脱水，临界点干燥后，黏附于载物台上，真空喷金，环境扫描电镜(XL30，ESEM)观察关节表面的情况。 　　1.4 透射电镜观察 　　bFGF组和对照组分别取4个标本，于软骨缺损局部取修复组织，软骨修复组织放入2％戊二醛磷酸缓冲液中(含0.2％钌红)，置4℃冰箱中固定48 h。将标本修整为宽约1.0 mm的长条形，PBS漂洗；1％的四氧化锇固定2 h，再PBS漂洗；乙醇逐级脱水，环氧树脂包埋，超薄切片；醋酸双氧铀与柠檬酸铅双重染色；Hitachi600透射电镜观察软骨修复细胞及胶原纤维上蛋白多糖颗粒的变化。 　　2 结 果 　　2.1 光镜观察 　　对照组缺损局部只有部分修复组织，关节面不平整，修复细胞排列紊乱(见图1)。bFGF组修复软骨组织与周围软骨平齐，关节表面较平整，修复细胞密度较高，排列较为杂乱(见图2)。 利用Sellers等［1］对骨软骨缺损修复组织的评分标准进行评定，Sellers对骨软骨修复组织的评分标准包括缺损的修复程度、修复细胞形态、修复组织与临近软骨组织的整合、修复组织表面情况，软骨下骨形成情况及潮标形成情况等8方图2 术后3个月，bFGF组关节软骨缺损能修复，关节面基本平整(HE，×100)面，最低0分，最高31分。分数越低，表明修复组织质量越好。 应用 bFGF侧为10.7