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　　hTERT反义寡核苷酸对HL 作者：孙玲，王峰，孙慧，乐晓萍，葛秀峰，姜中兴，张钦宪 【摘要】 　　为了 研究 hTERT基因反义寡核苷酸（ASODN）对HL-60细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用，并探讨HL-60细胞端粒酶活性与hTERT基因表达的关系， 应用 反义寡核苷酸封闭HL-60细胞hTERT基因的表达，RT-PCR 方法 检测该基因表达抑制情况，倒置显微镜观察细胞形态变化，MTT法检测细胞增殖状态，应用TRAP-ELISA、TRAP方法检测HL-60细胞端粒酶活性。结果发现：反义硫代寡核苷酸作用于HL-60细胞72小时后，hTERT基因表达明显受抑，细胞生长受抑，增殖能力减弱，其抑制作用具有序列特异性及浓度、时间依赖性。端粒酶活性检测显示：反义寡核苷酸10、20和30 μmol/L作用组OD450-690值分别为1.504±0.47、1.223±0.39，0.944±0.16，与未作用组（2.648±0.42）比较，差异有显著性（Plt;0.05）；正义寡核苷酸20 μmol/L作用组（OD450-690值为2.376±065）与未作用组比较，差异无显著性（Pgt;0.05）。TRAP检测表明： hTERT ASODN作用组较SODN作用组端粒酶条带明显减少，以30 μmol/L作用组条带最少。结论： hTERT基因反义寡核苷酸能够通过封闭hTERT基因的表达而抑制HL-60细胞增殖，下调端粒酶活性。 【关键词】 HL-60细胞； hTERT； 反义寡核苷酸； 端粒酶活性 　　Inhibition of hTERT Antisense Oligodeoxynucleotide on Proliferation and Telomerase Activity in HL-60 Cells 　　Abstract This study erase activity in HL-60 cells and to explore the relativity beterase activity and the expression of hTERT gene in HL-60 cells. After treated by hTERT ASODN the expression of hTERT orphological changes of HL-60 cells icroscopy，the cell proliferation easured by MTT method，and the telomerase activity ined e. OD450-690 values ol/L ASODN for 72 hours. The difference ol/L groups ol/L ASODN group respectively (Plt;0.05)，but the difference ol/L SODN group (2.376±0.65) erase image bands ol/L. It is concluded that the hTERT ASODN may inhibit the proliferation and doerase activity in HL-60 cells by sealing the expression of hTERT gene. 　　Key erase activity 端粒是真核细胞染色体末端特有的保护性结构，它能维持染色体末端的完整性。随着细胞的分裂、分化，端粒逐渐缩短，当端粒缩短至一定程度，细胞将出现衰老、死亡。端粒酶是一种逆转录酶，它能合成端粒并接到染色体末端，补充由于DNA分裂造成的端粒缩短，从而维持端粒长度，使细胞永生化［1］。研究表明：端粒酶活性增高与许多肿瘤的发生密切相关，在急性白血病中存在端粒酶的高表达［2］。人们普遍认为，端粒酶活化是肿瘤细胞无限增殖的必要条件。抑制端粒酶的活性可以达到抑制肿瘤细胞增殖及诱导肿瘤细胞凋亡的目的。人类端粒酶逆转录酶（human telomerase reverse transcriptase，hTRET）基因与端粒酶活性具有直接相关性［3］。我们利用反义技术将hTERT反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotide，ASODN）导入人类髓性白血病细胞株HL-60细胞，探讨其对白血病细胞的增殖及端粒酶活性的 影响 ，为开辟白血病 治疗 新途径提供有价值的实验室资料。 　　材料和方法 　　细胞培养 　　HL-60细胞为郑州大学医学院组胚教研室保存株，采用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液，将HL-60细胞置37℃、5% CO2、饱和湿度的恒温孵箱中培养。实验选用对数生长期细胞，细胞悬