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　　survivin启动子的克隆及其在前列腺癌细胞系中的活性鉴定 作者：骆晓梅，张南征，刘家云，苏明权，郝晓柯 【摘要】 目的 克隆survivin启动子片段，并检测其在人前列腺癌细胞中的转录活性，为该启动子在前列腺癌靶向基因 治疗 中的应用提供实验依据。方法 PCR方法扩增survivin基因启动子S1pro和S2pro，克隆入pGL3-Basic，分别构建重组质粒pGL3-S1pro和pGL3-S2pro，脂质体转染前列腺癌细胞和Chang liver肝细胞，检测survivin启动子在细胞中的转录活性。结果 survivin基因启动子在前列腺癌细胞中均具有较强活性，其中S2pro活性明显高于S1pro，达到CMV启动子活性的三分之一。结论 survivin启动子在前列腺癌细胞中具有较强启动活性，有可能成为新的前列腺癌靶向性基因治疗工具。 【关键词】 前列腺癌；基因；survivin；启动子；基因治疗 　　Abstract: Objective To clone DNA sequence of survivin promoter, and detect its transcriptional activities in human prostate cancer cells. Methods The fragment of survivin promoter plification and ids pGL3-S1pro and pGL3-S2pro, respectively. The reconstructed plasmids an prostate cancer cell lines LNCap, PC-3 and normal Chang liver cells. The transcriptional activities of survivin promoter in various cel1s ined by detection of the expression of luciferase. Results Survivin promoter had transcriptional activities in all prostate cancer cell lines and the transcriptional activity of the S2pro uch higher than the S1pro and reached a level of one third of the transcriptional activity of the CMV promoter. Conclusion The survivin promoter cloned in this study ore highly activated in prostate cancer cells than in normal cel1s, ight enable it to be a potential candidate promoter in the gene therapy of prostate cancer. 　　Key oter; gene therapy 　　随着 现代 分子生物学技术的 发展 ，靶向性基因治疗已成为前列腺癌治疗研究的热点，而寻找高效特异的启动子则是基因治疗研究的关键。本实验通过构建survivin基因启动子调控的真核表达载体,转染前列腺癌细胞，探讨并评价survivin启动子作为前列腺癌特异性启动子的可能性，为进一步将其应用于前列腺癌靶向基因治疗研究打下基础。 　　 1 材料和方法 　　1.1 材料 荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic、含有CMV启动子的p3.1-LUC（张翔等构建［1］）、前列腺癌细胞系LNcap、PC-3和正常肝细胞系Chang liver均购自中科院上海细胞所，本室保存。DNAZOL和RPMI 1640为Gibco公司产品；DNA聚合酶、SacⅠ、HindⅢ和T4 DNA连接酶为Takara公司产品；脂质体Lipofectamine 2000为Invitrogen公司产品；质粒纯化试剂盒及胶回收试剂盒为Promega公司产品。其他试剂均为国产或进口分析纯。 　　1.2 方法 　　1.2.1 survivin基因启动子引物的设计和合成 根据GenBank中survivin启动子序列及引物设计原则，设计survivin启动子两对引物，分别扩增survivin启动子基因片段S1（第-268～＋1位）和片段S2（第-268～＋30位）。上、下游引物5′端分别含有pGL3-Basic载体多克隆位点中包含的SacⅠ和HindⅢ限制性内切酶序列。上游引