HPLC测定桂枝汤不同配伍中桂皮酸和桂皮醛的含量.docVIP

　　HPLC测定桂枝汤不同配伍中桂皮酸和桂皮醛的含量 【摘要】 建立HPLC法测定桂枝汤中桂皮酸和桂皮醛含量的分析方法，研究配伍对桂枝汤中桂皮酸和桂皮醛含量的影响。［方法］采用L16（215）正交设计，以HPLC法测定桂皮酸和桂皮醛含量。［结果］不同配伍对桂枝汤中桂皮酸、桂皮醛含量有影响。［结论］该方法测定样品成分含量方法准确，敏捷，数据可靠，为药效学提供了 科学 定量依据。 【关键词】 桂枝汤；桂皮酸；桂皮醛；配伍；HPLC法 本研究引入正交设计,合理安排方中甘草、芍药、大枣、生姜与桂枝配伍，采用HPLC法,测定了桂枝与方中其它药物配伍后，其主要成分的含量变化，为进一步研究桂枝汤的含量测定、配伍 规律 、作用机制等提供 参考 。 　 　1 药品与材料 　　1.1 仪器 　　Agilent 1100 Series高效液相色谱仪；METTLER AE240 电子 分析天平；SB3200超声波清洗器。 　　1.2 试剂 　　 　　流动相乙腈为色谱纯；水为重蒸馏水；其它试剂均为分析纯。桂皮酸、桂皮醛对照品由昆明海升林科技有限公司提供（批号分别为110786200503，110710200714，供含量测定）。 　　1.3 中药材 　　桂枝、芍药、甘草、生姜、大枣由宜昌市众生药业有限公司提供（经宜昌市药品检验所魏俊德主任药师鉴定上述药材符合2005年同家药典）。 　 　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　色谱柱为NVCLEOSIL C18（10μm，4.6mm×250mm），流动相为乙晴0.1%醋酸水溶液（33∶67），检测波长为285nm，柱温为35℃，流速为1.0ml·min,进样量为10μl［2］。在此条件下，对照品和样品色谱图见图1和图2。 　　2.2 对照品及供试品溶液的制备 　　2.2.1 对照品溶液的配制 　　精密称取桂皮酸、桂皮醛对照品适量，分别置于100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀，放置，滤过，作为贮备液。另取贮备液5ml，加甲醇稀释至100ml，制成每1ml含桂皮酸44μg的对照品溶液。 　　2.2.2 供试品溶液的制备 　　按桂枝汤配方比例，精密称取桂枝9g，芍药9g，炙甘草6g， 生姜9g，大枣4枚，加药材5倍水，加热回流2h，四层纱布过滤，精密量取2ml, 置10ml容量瓶中，加甲醇定容至10ml,滤液放冷后过0.45μm微孔滤膜，得供试品溶液。 　　2.2.3 标准曲线 　　精密量取桂皮酸和桂皮醛对照品溶液各2μl、4μl、6μl、8μl、10μl、12μl，分别注入高效液相色谱仪，以浓度(X)为横坐标，色谱峰面积(Y)为纵坐标，求得回归方程：桂皮酸和Y=7387.25x+9.467 r=0.9999(n=6)、桂皮醛Y=9485.24x+22.414 r=0.9999(n=6)。表明桂皮酸在88.5μg·ml～531μg/ml、桂皮醛在95.14μg/ml～570.8μg/ml范围内线性良好。 　　2.2.4 精密度试验 　　精密量取对照品溶液各10μl，连续进样5次，按上述色谱条件进样测定，所得峰面积分别是桂皮酸：3281、3222、3280、3280、3283，RSD=0.8%（n=5）；桂皮醛：4584、4504、4576、4578、4575，RSD=0.8%（n=5）。 　　2.2.5 重复性试验 　　取某一份供试品溶液，按照2.2.3项下“精密量取2ml”同法操作，平行制备5份供试品溶液，分别于2、4、6h测定桂皮酸和桂皮醛的峰面积，峰面积分别为桂皮酸：2167、2175、2175，RSD=0.2%（n=3）；桂皮醛8919、8891、8887，RSD=0.2%（n=3）。表明供试液在6h内稳定。 　　2.2.6 稳定性试验 　　取某一份供试品溶液，在配制后0，2，4，6，8，12h进样，测定桂皮酸、桂皮醛含量，其RSD=0.2%，表明6h内溶液稳定。 　　2.2.7 加样回收率测定 　　精密称取桂枝0.8g，分别于10 ml量瓶中.精密加入浓度为桂皮酸对照液1ml.按照2.2.3项下同法操作，依次测定含量，桂皮酸平均回收率为99.9%，RSD=0.1%（n=5）、桂皮醛平均回收率为91.8%，RSD=1%（n=5）。 　　2.3 实验方案 　　为考察芍药、甘草、生姜、大枣及两两协同作用对桂皮酸、桂皮醛含量的影响，合理安排各因素、因素水平，采用正交设计安排试验。设置四因素，两水平，以桂皮酸、桂皮醛含量作为考察指标。用L16（215）作表头设计： 　　2.3.1 因素水平 见表1。表1 因素水平表（略） 　　2.3.2 实验结果 　　供试品溶液的制备按2.2.2项下方法，试验安排及测定结果见表2。表2 试验安排及结果（略） 　 　3 讨论