HPLC测定橘叶中橙皮苷的含量.docVIP

　　HPLC测定橘叶中橙皮苷的含量 【摘要】 目的：建立高效液相色谱法测定橘叶中橙皮苷含量的 方法 。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为kromasil C18（4.6 mm×250 mm,5　μm）,流动相为甲醇—醋酸（36%）—水（38∶2∶60），检测波长为283　nm。结果：橙皮苷检测浓度在（0.05～0.5） mg/mL范围内线性关系良好（r=0.999 5），平均加样回收率为96.6%，RSD=1.9%（n=5）。结论：本方法简便、灵敏、准确，可用于橘叶的质量控制。 【关键词】 高效液相色谱法 橘叶 橙皮苷 含量测定 1 实验材料 高效液相色谱仪为SSI-series Ⅳpump泵SSI Model 500-DETECTOR单元液相色谱仪；PC-3000系统检测仪；TL-9000色谱工作站；超声处理器（LC-350A）；甲醇为国产色谱纯溶剂，天津市永大化学试剂开发中心出产；乙酸为国产 分析 纯试剂；水为实验室专用纯水机XYD-10-H处理超纯水；橙皮苷对照品由 中国 生物制品检验所提供，批号：110721-200512；橘叶8批，由中药材市场购买，均由山西省药品检验所中药室主任和建国鉴定。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱为4.6 mm×250 mm，十八烷基键合硅胶为填充剂，柱温为常温，检测波长为283 nm，以甲醇—醋酸（36%）—水（38∶2∶60）为流动相，流速0.8 μL/min。对照品及样品的液相色谱图见图1。 A. 对照品 B. 样品 1. 橙皮苷 图1 对照品及样品的HPLC图 2.2 对照品溶液制备 精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.4 mg橙皮苷的溶液，摇匀，作为对照品溶液备用。 2.3 供试品溶液制备 将收集的橘叶研成粗粉，精密称定1 g，置索氏提取器中，加石油醚（60℃～90℃）80 mL，加热回流3 h，弃去石油醚，药渣挥干，加甲醇80 mL，再加热回流至提取液无色，放冷，滤过，滤液置100 mL量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇定容至刻度。 2.4 线性关系考察 精密称取橙皮苷对照品0.000 54 g、0.001 03 g、0.002 04 g、0.004 16 g、0.005 09 g分别置10 mL容量瓶中加甲醇制成每1 mL含0.05 mg、0.1 mg、0.2 mg、0.4 mg、0.5 mg橙皮苷的溶液，各取10 μL注入色谱仪中,按色谱条件测得峰面积积分值，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=204 621 152 700X+2 155 993.329，r=0.9 995，橙皮苷在（0.05～0.5） mg/mL呈良好的线性关系。 2.5 精密度试验 精密吸取2.2中的对照品溶液（0.4 mg/mL）10 μL连续进样6次，测橙皮苷峰面积，结果分别为88 652 906、86 590 036、85 480 256、87 424 068、87 424 661、87 679 805，RSD为0.9%。表明仪器进样精密度良好。 2.6 稳定性实验 取2.3供试样品溶液分别在0 h、2 h、4 h、8 h、20 h进样10 μL，测得橙皮苷的峰面积分别为25 926 741、26 104 361、26 181 248、26 653 055、25 888 751，RSD为2.3%。表明供试品溶液在室温下20　h内基本稳定。 2.7 重现性实验 取亳州市场购买的江苏产地的橘叶，按2.3供试品溶液制备 方法 制备6份，分别进样10　μL，测定RSD为1.7%。表明测定方法重现性良好。 2.8 加样回归试验 取已知含量的药材5份，分别加入同样含量的橙皮苷对照品，按供试品溶液制备方法和测定条件测定。结果见表1。 2.9 样品测定 取不同产地橘叶药材，按2.3方法制备供试品溶液，测定橙皮苷含量，结果见表2。 3 含量测定限度 根据表2橙皮苷含量测定结果，将橘叶药材的橙皮苷含量限度定为本品按干燥品 计算 ，含橙皮苷（C28H34O15）不得少于1.25%。 4 讨 论 用HPLC测定橘叶中橙皮苷的含量，结果准确，精密度、重现性良好，平均回收率96.6%，RSD为1.9%。在提取方法上，比较了超声处??与加热回流提取的效果，结果表明加热回流提取比较完全，因此 应用 加热回流法。橙皮苷可以作为橘叶质量控制的指标。 【 参考