HPLC测定健脾增肥片中橙皮苷含量.docVIP

　　HPLC测定健脾增肥片中橙皮苷含量 【摘要】 目的 建立健脾增肥片中橙皮苷的测定方法。方法 采用HPLC法，色谱柱：KromasilC18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为甲醇醋酸水(体积比35∶4∶61)，柱温为室温，流速为1.0 mL·min-1，检测波长为283 nm。结果 橙皮苷在0.300 8～2.105 6 μg范围与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 9，n=7)，平均回收率为101.68%，RSD为1.45%。结论 该方法精密度高、重现性好，可用于健脾增肥片的质量控制。 【关键词】 健脾增肥片;橙皮苷;HPLC法 　　Abstract:Objective To establish a determination method for hesperidins in JianpizengfEi tablets by HPLC. Methods HPLC ed on a Kromasil C18 column(250 mm×4.6 mm, 5 μm) obile phase at a floL·min-1 and the detection .Results It shoethod is sensitive, accurate, reproducible, specific and can be used for the quality control of JianpizengfEI tablets efficiently. 　　Key asilC18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);德国BP211D Sartorius 电子 天平(十万分之一);橙皮苷对照品(批号0721200010)购自中国药品生物制品检定所;健脾增肥片(自制，批号090326、090411、090606);甲醇为色谱纯;水为重蒸水;其它试剂均为分析纯。 　 　2 方法与结果 　　2.1 溶液的制备 　　2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取橙皮苷对照品适量，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释制成每1 mL中含75.2 μg的溶液，摇匀，0.2 μm微孔滤膜滤过，即得。 　　2.1.2 供试品溶液的制备 取本品研细，称取细粉约1 g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密移入甲醇25 mL，精密称重，超声90 min，取出，放冷至室温，以甲醇补足重量，摇匀，0.2 μm微孔滤膜滤过，即得。 　　2.1.3 阴性对照液的制备 取处方组成中除陈皮外的其余各味药材，按健脾增肥片生产工艺制成缺陈皮的阴性对照品，按“2.1.2”项下的方法制备得阴性对照液。 　　2.2 色谱条件及系统适用性试验 色谱柱：Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相：甲醇醋酸水(体积比35∶4∶61);流速：1.0 mL·min-1;检测波长：283 nm。分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照液10 μL注入液相色谱仪，橙皮苷的保留时间约为20.1 min，理论塔板数以橙皮苷峰计不低于5 000，橙皮苷与其他物质可基线分离，且阴性对照液无干扰，见图1。 　　2.3 线性关系考察 分别精密吸取橙皮苷对照品溶液4、8、12、16、20、24、28 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积。以峰面积(Y)为纵坐标，橙皮苷进样量(X)为横坐标，进行线性回归，得回归方程为Y=1507500 X-11112，r=0.999 9(n=7)，表明橙皮苷在0.300 8～2.105 6 μg范围内呈良好的线性关系。 　　2.4 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 μL，连续进样6次，峰面积的RSD为0.73%，表明仪器精密度良好。 　　2.5 稳定性试验 取健脾增肥片(批号090326)，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，分别在0、0.5、1、1.5、2、3、4、5、6 h进样10 μL，记录峰面积。结果峰面积的RSD为1.48%，表明供试品溶液在6 h内稳定，可满足测定需要。 　　2.6 重复性试验 取同一批号样品(批号090326)样品6份，按“2.1.2”项下方法制备并进行测定，经外标法 计算 ，橙皮苷平均含量为4.253 mg·g-1，RSD为0.38%，结果表明本方法具有较好的重复性。 　　2.7 加样回收率试验 取已知含量的健脾增肥片(批号：090326)0.5 g，精密称定，共6份，分别精密加入橙皮苷对照品储备液(每1 mL中含橙皮苷0.504 mg)5.0 mL，精密移入甲醇20 mL，依法测定，橙皮苷平均加样回收率为101.68%，RSD1.45%。结果见表1。表1 橙皮苷加样回收率试验结果 　　2.8 样品含量测定 取3批健脾增肥片(090326、090411、090606)，按 “2.1.2