丙戊酸钠对慢性粒细胞白血病细胞株Ｋ５６２增殖和凋亡的影响.docVIP

　　丙戊酸钠对慢性粒细胞白血病细胞株Ｋ５６２增殖和凋亡的影响 【摘要】 探讨丙戊酸钠（ＶＰＡ）对慢性粒细胞白血病细胞株（Ｋ５６２细胞）增殖的 影响 及其可能机制。【 方法 】 利用ＣＣＫ-８法检测药物对细胞生长的影响；利用流式细胞仪检测药物处理后的细胞凋亡和细胞周期情况。【结果】 ＶＰＡ对Ｋ５６２细胞生长具有浓度-时间依赖性抑制作用；同时引起细胞凋亡增加（１１．４７％ ± ０．２５％），与正常对照组（４．７７％ ± ０．４０％）比差异有统计学意义（Ｐ ＜ ０．０５）；Ｇ０／Ｇ１期细胞增多（８２．３０％ ± ９．４１％），Ｓ期细胞减少（１２．８８％ ± ６．９９％），细胞被阻滞在在Ｇ０／Ｇ１期（Ｐ ＜ ０．０５）。【结论】 ＶＰＡ能够阻滞Ｋ５６２细胞于Ｇ０／Ｇ１期，最终抑制肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡。 【关键词】 丙戊酸钠 性粒细胞白血病 Ｋ５６２细胞 增殖 凋亡 　ｏｆ ｓｏｄｉｕｍ ｖａｌｐｒｏａｔｅ（ＶＰＡ） ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ Ｋ５６２，ａｎｄ ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ． 【Ｍｅｔｈｏｄｓ】 Ｋ５６２ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＶＰＡ． Ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ＣＣＫ-８ ａｓｓａｙ． Ｃｅｌｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ （ＦＣＭ）． 【Ｒｅｓｕｌｔｓ】 ＶＰＡ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｋ５６２ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ- ａｎｄ ｔｉｍｅ-ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍａｎｎｅｒｓ． Ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｒａｔｅ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｉｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＶＰＡ ｔｈａｎ ｉｎ ｕｎｔｒｅａｔｅｄ ｃｅｌｌｓ［（１１．４７％±０．２５％）ｖｓ（４．７７％±０．４０％）， Ｐ ＜ ０．０５］． Ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ＶＰＡ， ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｗａｓ ａｒｒｅｓｔｅｄ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ａｔ Ｇ０／Ｇ１ ｐｈａｓｅ （Ｐ ＜ ０．０５）． 【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ】 ＶＰＡ ｃｏｕｌｄ ｉｎｄｕｃｅ Ｇ０／Ｇ１ ｐｈａｓｅ ａｒｒｅｓｔ， ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅ ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ Ｋ５６２ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｓｏｄｉｕｍ ｖａｌｐｒｏａｔｅ； ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ； Ｋ５６２ ｃｅｌｌ； ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ； ａｐｏｐｔｏｓｉｓ 　　近年来 研究 发现组蛋白去乙酰化酶抑制剂（ｈｉｓｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ＨＤＡＣＩ）可诱导多种肿瘤细胞生长阻滞、分化及凋亡［１-３］。丙戊酸钠（ｓｏｄｉｕｍ ｖａｌｐｒｏａｔｅ，ＶＰＡ）是一种传统的抗癫痫药物，其在抗癫痫有效 治疗 浓度时也表现出很强的ＨＤＡＣＩ活性［４］；慢性粒细胞白血病是临床上一种比较常见的恶性血液病，ｔ（９；２２）形成Ｐｈ染色体是其特征性细胞遗传学改变，由此形成的Ｂｃｒ／Ａｂｌ融合基因是其发病的分子机制和新药物（如格列卫）作用靶点。尽管格列卫取得了极好的疗效，但临床仍然观察到耐药的情况［５］。所以为了克服耐药，临床上迫切需要开发新一代作用于Ｂｃｒ／Ａｂｌ融合基因的靶向药物或其他不同机制的抗肿瘤药物。本实验探讨了ＶＰＡ对慢性粒细胞白血病急变期细胞株Ｋ５６２细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。 　　１ 材料和方法 　　１．１ 主要试剂 　　ＶＰＡ购自法国赛诺菲安万特公司。１６４０培养基为Ｇｉｂｃｏ公司产品，胎牛血清（ｆｅｔａｌ ｃａｌｆ ｓｅｒｉｕｍ， ＦＣＳ） 购自杭州四季青生物公司。ＣＣＫ-８试剂盒为碧云天公司产品，ＡｎｎｅｘｉｎＶ-ＦＩＴＣ 凋亡和细胞周期 分析 试剂盒为Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ 公司产品。Ｋ５６２细胞株由中山大学肿瘤研究所提供。 　　１．２ 方 法 　　１．２．１ 细胞培养 　　Ｋ５６２细胞用含１００ ｇ／Ｌ灭活ＦＣＳ的ＲＰＭＩ １６４０培养液重悬后，置于３７ ℃、体积分数５％ ＣＯ２饱和湿度培养箱中培养，每２ ～ ３天换液１次。 　　１．２．２ ＣＣＫ-８方法分析细胞增殖活性 　　取对数生长期的Ｋ５６２细胞，调整细胞终密度为１ × １０５／ｍＬ 接种于９６ 孔板，分别加入０．５、１、２、５、１０ 和２５ ｍｍｏｌ／Ｌ的ＶＰＡ，每孔