中国被毛孢发酵物对小鼠T、B淋巴细胞转化功能的影响.docVIP

　　中国被毛孢发酵物对小鼠T、B淋巴细胞转化功能的影响 【摘要】 ［目的］ 观察 中国 被毛孢发酵物对正常小鼠T、B淋巴细胞转化功能的影响。［方法］给予小鼠高（1.0g·kg-1）、低（0.1g·kg-1）剂量的中国被毛孢发酵物，观察其对小鼠T、B淋巴细胞转化功能的影响。［结果］中国被毛孢发酵物和冬虫夏草均能显著提高正常小鼠脾T和B淋巴细胞转化刺激指数（Plt;0.05，Plt;0.01）；［结论］ 中国被毛孢发酵物和冬虫夏草均均能提高正常小鼠免疫功能。 【关键词】 中国被毛孢发酵物；T淋巴细胞；B淋巴细胞 　　Abstract： ［Objective］ To observe the proliferation of T and B Lymphocyte in mouse after treated by Hirsutella sinensis strain fermentation.［Methods］ Mice entation by intragastric administration.The proliferation of T and B Lymphocyte from the spleen of mouse is detected by the MTT assay .［Results］ Hirsutella sinensis strain fermentation and Cordyceps Sinensis can distinctly increasse the stimulation index （SI） of T and B lymphocyte transformation.［Conclusion］ Hirsutella sinensis strain fermentation and Cordyceps Sinensis are able to enhance immune function of normal mouse. 　　Key entation; T lymphocyte; B lymphocyte 中国被毛孢是从青海新鲜冬虫夏草分离的冬虫夏草菌种，通过人工液体发酵并冻干得到中国被毛孢发酵物。90年代通过分子生物学方法鉴定，多次证明中国被毛孢为冬虫夏草无性型［13］。由于该菌种分离与培养都较其他真菌困难，中国被毛孢发酵物药理研究报道甚少，本实验初步观察了中国被毛孢发酵物对正常小鼠免疫系统的影响。 　 　1 材料 　　1.1 药物和试剂 　　中国被毛孢发酵物：黄色粉末，由杭州泰士生物科技有限公司提供，给药前药物高、低剂量组用蒸馏水分别配制成100mg·ml-1、10mg·ml-1的混悬液；冬虫夏草：杭州泰士生物科技有限公司提供，由青海省畜牧兽医 科学 院沈南英教授鉴定，临用前将冬虫夏草60℃烘干，打粉，药物高、低剂量组用蒸馏水分别配制成100mg·ml-1、10mg·ml-1的混悬液；刀豆素（ConA）：sigma公司，批号：11028710；脂多糖（LPS）：sigma公司，批号：024K4067；RPMI1640培养液：GIBCO公司，批号：1165062；噻唑蓝（MTT）溶液：sigma公司，批号：3154B79。 　　1.2 动物 　　18～20g SPF级ICR小鼠，来源：中科院上海实验动物试验中心/上海斯莱克实验动物公司，生产许可证：SCXK（沪）20070006。 　　1.3 仪器设备 　　128C340型酶标仪：奥地利CliniBio公司；CB150型CO2培养箱：德国Binder公司； DL5B型离心机：上海安亭科学仪器厂制造；ZEiSS AXIOVERT 200倒置显微镜：德国ZEISS公司。 　　 2 方法 　　2.1 分组 　　取18～20g的雄性ICR小鼠50只，按体重随机分5成组：空白对照组、中国被毛孢发酵物高剂量组1.0g·kg-1、中国被毛孢发酵物低剂量组0.1g·kg-1、冬虫夏草高剂量组1.0g·kg-1及冬虫夏草低剂量组0.1g·kg-1，每组10只。 　　2.2 给药方法 　　除空白对照组灌蒸馏水外，其余组每d灌胃给药1次，连续7d。 　　2.3 小鼠脾淋巴细胞悬浮液的制备［45］ 　　末次给药后30min，小鼠摘眼球放血致死，75%乙醇浸泡5min，无菌取脾，用1ml注射器塞磨碎，尼龙绸布过滤到10ml离心管中，用Hank’s液洗涤，合并洗涤液，1500rpm离心5min，弃上清，加Hank’s液至7ml，细胞混匀，再离心，重复2次。进行细胞计数，以RPMI 1640完全培养液稀释至1×107 个/ml的脾细胞混悬液备用。 　　2.4 MTT法淋巴细胞增殖反应实验［45］ 　　新鲜分离的1×107cell/ml