人参茎叶皂苷中人参皂苷Re含量的反相高效液相色谱测定方法的改进.docVIP

　　人参茎叶皂苷中人参皂苷Re含量的反相高效液相色谱测定方法的改进 【摘要】 　　目的改进高效液相色谱法测定人参茎叶皂苷中人参皂苷Re的方法。方法最佳色谱条件：ODS（150 mm×4.6 mm，5μm）为色谱柱，采用梯度洗脱（乙腈与水），检测波长203 nm，流速1.0 ml/min。结果人参皂苷Re的回归方程为Y=9 505.448 8X－1 159.607 0，r＝0.999 8，线性范围为1.88 ～60.16 μg/ml，平均回收率为99.35% (RSD=0.49%,n=6)。结论采用改进的测定方法简单、准确和重现性好，适合人参茎叶皂苷中人参皂苷Re的质量控制。 【关键词】 人参茎叶皂苷； 人参茎叶皂苷Re； 反相高效液相色谱 　　Abstract：ObjectiveTo improve the HPLC method for determination of ginsenosid Re in ginsenosides. MethodsODS column（150 mm×4.6 mm，5 μm） obile phase consisted of CH3-H2O, the detection ，and the flol/min.ResultsThe regression equation of ginsenoside Re l, the average recovery of ginsenosid Re ethod is simple, quick, and reproducible and it is suitable for the quality control of Panax ginseng. 　　Key -pack VP-ODS分析柱（150 mm×4.6 mm,5 μm）；流动相为乙腈－水；流速1.0 ml/min；检测波长203 nm；柱温：35℃；梯度条件见表1。 　　表1 流动相的梯度洗脱（略） 　　在上述色谱条件下，人参皂苷Re与杂质完全分离，人参皂苷Re的保留时间约17 min（图1～3），理论塔板数按人参皂苷Re峰 计算 大于2 500。 　　图1 空白溶液高效液相色谱图（略） 　　图2 人参皂苷Re对照品溶液高效液相色谱图（略） 　　图3 样品溶液高效液相色谱图（略） 　　2.2 对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Re对照品5 mg（真空干燥至恒重）置25 ml量瓶中，加少量甲醇，超声溶解30 min，待溶液恢复常温后，用甲醇稀释至刻度，用0.22 μm的微孔滤膜过滤溶液备用。 　　2.3 线性关系考察精密吸取上述人参皂苷Re对照品溶液，分别进样0.25，0.50，1.0，2.0，4.0，8.0 μl，按上述色谱条件测定峰面积。以人参皂苷Re对照品进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。经线性回归，人参皂苷Re的回归方程为：Y=9 505.448 8X－1 159.607 0，r＝0.999 8，在1.88～60.16 μg/ml范围内线性关系良好。 　　2.4 精密度实验对含人参皂苷Re低、中、高3种浓度的标准溶液，于同日内分别测定6次，并对上述3种浓度的标准溶液于不同天分别测定6次。结果见表2。 　　2.5 稳定性实验吸取同一供试样品溶液分别于0，4，6，8h及第1，2，4天后分别测定结果RSD分别为0.63%，1.13%，表明该样品溶液3 d内稳定。 　　2.6 重复性实验取同一批号样品号），照“2.2”项下方法制备6份，分别测定， 计算 RSD为0.52％。 　　表2 日内及日间差异实验结果（略） 　　2.7 加样回收率实验采用加样回收法。分别精密称取已测知含量的样品（含量人参皂苷Re12.2%）约10 mg ，共计6份，每2份为1组，每组分别加入18.80 μg/ml的人参皂苷Re对照品1，5，10 ml，精密加甲醇至50 ml，密塞、超声提取30 min，放冷，用甲醇补足失重，用0.22 μm滤膜过滤，测定实际含量，计算回收率，结果见表3。 　　表3 回收率实验结果（略） 　　2.8 供试品溶液的制备取号）样品，按“2.2”项下供试品溶液的制备方法，以人参皂苷Re含量为优选指标，分别超声处理15，30，45 min。结果表明超声处理30 min为最佳提取时间。 　　取供试品约10 mg，精密称定，至25 ml量瓶中加甲醇，超声溶解30 min，待溶液恢复常温后，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.22 μm滤膜过滤，即得。 　　2.9 样品测定按“2.2”项的方法进行处理3批样品，照上述色谱条件，反复进样6次。结果见表4。 　　表4 样品含量测定结果（略） 　　3 讨论 　　为了提高分离效能，本实验采用梯度