信号传导与激活因子2基因在食管癌中的表达.docVIP

　　信号传导与激活因子2基因在食管癌中的表达 【摘要】 目的： 筛选食管癌中特异表达的基因，进一步了解食管癌发生的分子机制。 方法 ： 利用荧光差异显示技术(DD-PCR)获得差异表达的片段，对这些片段进行克隆和序列 分析 。通过在基因库中同源性检索，查找差异片段相对应的同源基因。利用实时荧光定量PCR技术在食管癌临床标本中进行验证。结果： 通过DD-PCR获得的差异片段中有一个片段对应于信号传导与激活因子2(stat2)基因，该基因的读码框长2 556 bp，编码852个氨基酸，编码蛋白分子量约97.9 kD。 应用 实时荧光定量PCR方法进一步验证发现该基因在食管癌组织中的表达量高于其对应的癌旁组织（Plt;0.05, n=16）。结论： stat2基因在食管癌组织中呈高表达，推测其可能在食管癌的发生 发展 中起一定的作用。 【关键词】 荧光差异显示; 定量PCR; 食管癌; 信号传导与激活因子2; 基因表达 　［Abstract］ Objective: To further investigate the molecular mechanism of esophageal carcinogenesis, and to validate the genes expressed differently in esophageal cancer. Methods： mRNA differential display(DD-PCR) ployed to search differently expressed fragments, some of ology analysis in GenBank, corresponding homologous genes of those fragments ents e quantitative PCR. Results： By DD-PCR, one of the highly expressed EST in cancer tissues o sapiens signal transducer and activator of transcription 2(stat2)gene. The results of real-time quantitative PCR shoal tissues(n=16, Plt;0.01). The ORF of stat2 gene ino acids. The molecular ay indicate an important role in the occurrence and development of esophageal cancer. 　［Key e quantitative PCR; esophageal cancer; stat2; gene expression 　　食管癌是最主要的恶性肿瘤类型之一，我国是世界上食管癌的高发地区。同时，食管癌的发生在我国也具有地区差异性，如河南省林县和江苏省扬中地区等都是食管癌高发地区。 目前 ，已发现一些食管癌的癌变机制相关因素，但关键原因尚未明确［1］。癌基因、抑癌基因和细胞周期控制基因的异常表达参与了食管癌及其他恶性肿瘤的演进［2］,如Ohta等［3］的 研究 表明肿瘤抑制基因-FHIT基因，在大约50%的食管癌、胃癌和结肠癌中存在转录异常，Gleeson等［4］在Barrett食管腺癌中发现了特异性p53突变谱。而细胞周期控制基因cyclinD1的扩增与食管鳞癌明显相关［5］。在癌基因中stat(singnal transducers and transcription activator， stat)家族和myc家族等均对肿瘤的发生起重要作用。STAT家族是具有高度同源性的转录因子，可介导多种细胞因子和生长因子的信号向细胞核内转导， 影响 靶基因的转录，从而调节细胞功能，与肿瘤发生、发展和凋亡有密切关系［6］。目前有关stat2在各种肿瘤中表达状况的报道很少，本研究应用mRNA定量分析的方法发现stat2基因在食管癌中呈现高表达，为食管癌发生的机制研究提供了新思路。 　　1 材料与方法 　　1.1 临床材料 　　标本来自2006年6月至11月于江苏大学附属 医院 接受手术 治疗 的16例食管癌患者。每例患者均取手术切除的食管癌组织及癌旁正常组织，并经病理检查证实。组织离体后立即在液氮中速冻，并置于-70 ℃冰箱中保存。 　　1.2 试剂和仪器 　　RNA提取试剂Trizol购自Invitrogen公司，荧光差异显示试剂盒购于Genhunter公司，SuperScriptⅡ反转录试剂盒购于Gibco公司，荧光定量PCR试剂盒和PMD18T-vector试剂盒购于TaKa