2011细胞工程讲稿.docVIP

第1章 细胞培养基本知识 1.1前言 组织培养工作始于20世纪初(Harrison 1907，Carrel 1912)，现已广泛应用于生物学、医学各个领域，成为细胞与组织研究的重要技术之一。细胞培养是一种笼统的提法。严格地说，细胞培养应包括动物和植物的细胞培养。本书仅讨论动物的细胞培养，简称为细胞培养。本名词泛指所有体外培养，其含义是指从动物活体体内取出组织，于模拟体内生理环境等特 定的体外条件下，进行孵育培养，使之生存并增殖。若以培养物而言，可分为组织培养、细胞培养和器官培养。组织培养指把活体的一小片组织置于底物上孵育，细胞自其周围移出并增殖。细胞培养是把取得之组织用机械或消化的方法分散成单个细胞悬液，然后进行培养、增殖。这些培养物的主要成分均屑细胞，而这些细胞在体外增殖时，仍然是相互依存、互相影响的。因此，细胞培养与组织培养实际上区别不大，本书将细胞培养与组织培养以相同的含义使用。此外，体外培养中尚有一种培养物，系将活体中器官或一部分器官取出，置于体外生存、生长并同时保持其一定的结构和功能特征，特称为器官培养，以与一般的细胞培养相区别。 细胞培养具有很多优越性，但也存在一定的局限性，因此对之应有全面的认识。 细胞培养的主要优点如下： (1)研究的对象是活的细胞。这是细胞培养最重要的优点。在实验过程中，根据要求可始终保持细胞的活力，并可长时期地监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括其形态、结构和生命活动等。 (2)研究的条件可以人为地控制。这也是另外的实验方法如体内试验等难以比拟的。进行体外细胞培养的实验时，可以根据需要，控制包括pH、温度、O：张力、COz张力等物理化学的条件，并且可能做到很精确以及保持其相对的恒定。同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验、观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。 (3)研究的样本，具有均一性。取自一般的组织样本，其构成的细胞类型含有多种，即使是来源于同一组织，也不能做到均一性。但是，通过细胞培养一定的代后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属同一类型的细胞；需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。 (4)研究的内容便于观察、检测和记录。体外培养的细胞可采用各种技术和方法来观察、检测和记录，充分地满足实验的要求。如：通过倒置相差显微镜、电视、电影等直接观察活的细胞；电子显微镜分析细胞的超微结构；同位素标记、放射免疫等方法检测细胞内物质的合成、代谢的变化等。 (5)研究的范围比较广泛。多种学科均可利用细胞培养进行研究，如：细胞学、免疫学、肿瘤学、生化学、遗传学、分子生物学等。可供实验的组织来源众多，包括各种动物的各类组织，可以是啮齿类动物或哺乳类动物；可以是动物的胚胎或成体；可以是正常组织或肿瘤组织等。 (6)研究的费用相对较经济。由于细胞培养有可能大量提供相同时期、条件、性状的实验样本，因此有时可比体内试验经济得多。例如：一个需要100只鼠才能得出结论的实验可能用100片盖玻片或几个多孔培养板便可获得具有相同统计学意义的结果。 细胞培养虽然具有很多优点，但是亦存在一定的不足。最根本的问题是尽管培养技术不断发展，并努力创造条件以模拟动物体内状况，但是体外培养的组织或细胞与体内相应者仍然存在差异。体外培养的环境与体内的不完全相同，特别的是培养环境缺乏神经和内分泌系统等的调节。缺乏这些控制，体外的细胞比体内细胞的代谢可能更恒定，但可能并不能真 实代表细胞来源的组织。可以说，任何组织或细胞置于体外培养后，其细胞形态和功能都会发生一定程度的改变。因此，对于体外培养的细胞，应该把他们视作一种既保持动物体内原细胞一定的性状、结构和功能又具有某些改变的特定的细胞群体，而不能将之与体内的细胞完全等同。这一点，在进行研究、分析时应予注意。培养的细胞存在一定的不稳定性也是 其缺点之一。体外培养的细胞，尤其是反复传代、长期培养者，有可能发生染色体非二倍体改变等情况。另外，细胞培养对人员、设备等条件均要求较高。这些都影响细胞培养技术的更广泛应用。 总体说，细胞培养的确是一种研究活组织和活细胞的良好方法。利用这一技术，可进行多方面的研究。归纳起来，可列为下述5方面。 (1)细胞内的活动：例如能量的代谢、DNA转录、凋亡以及蛋白质的合成等。 (2)细胞内部与细胞外界之间的作用：例如细胞对外界刺激的反应、药物对细胞的作用、细胞内产物的分泌等。 (3)细胞与细胞之间的相互作用：例如形态发生、细胞与细胞之间的黏着作用、接触抑制、密度抑制等。 (4)细胞内的流动：如信号的传导、钙离子的流动、RNA的移动、激素受体复合物的易位等。 (5)遗传学：如遗传学分析、转染、转化等。