1个小麦NBS类抗病基因同源cDNA序列的克隆与鉴定.pdf

植物病理学报 ACTAPHYTOPATHOLOGICASINICA 39(5)：507—513(2009) 1个小麦 NBS类抗病基因同源 cDNA序列的克隆与鉴定 王海燕，刘大群 ，杨文香，李在峰，张立荣，张 娜 (河北省农作物病虫害生物防治丁程技术研究中心，河北农业大学植物保护学院，保定071001) 摘要 ：利用 cDNA末端快速扩增技术对小麦抗叶锈病近等基因系TcLr35中所获得的抗病基因同源片段 $2A25端和3末 端序列进行扩增，并根据拼接序列设计特异性引物 ，进行全长基因的扩增，获得了1个通读的NBS类抗病 同源基因$2A2 cDNA序列，该序列全长为 3476bp，编码 866个氨基酸序列。经 BLASTp比较 ，该片段含有 NB—ARC保守结构域和多个 LRR结构域 ，与已知植物抗病基因 ／2C一、L6、RPS2等相应区域相一致。半定量 RT—PCR分析表明，该基因在小麦叶片中为 低丰度组成型表达。本研究存 TcLr35小麦中成功获得了抗病同源基因，这为最终克隆小麦抗叶锈病基因Lr35奠定了基础 关键词 ：小麦抗叶锈病基因；cDNA末端快速扩增技术 ；同源序列 IdentificationandcloningofaNBSresistancegenehomologycDNA sequencefr0m wheat WANGHai—yan，LIUDa—qun，YANG Wen—xiang，LIZai—feng ，ZHANGLi—rong，ZHANGNa (BiologicalControlCenterofPlantDiseaseandPlantPestsofHebeiProvince，CollegeofPlantProtection，AgriculturalUniversi— tyofHebei，Baoding071001，China) Abstract：The5 and3 endoftheresistancegenehomologyfragment$2A2from TcLr35wereobtainedby therapidamplificationcDNAends(RACE)．Thegenespecificprimersweredesignedbasedonthespliced sequence，andthefulllengthsequenceof$2A2 obtainedwas3476bpencoding866aminoacids．BLASTpa— nalysis，thededucedaminoacidsof$2A2proteinconsistedofaNB—ARC conserveddomainandaleucine-rich repeats(LRR)domain，whichwereidenticaltotheconserveddomainsofplantresistancegenessuchas／2C— L6，andRPS2．The$2A2geneappearednottobeinducedbyPucciniatriticinaandwasaconstitutivegene ， withlow abundanceinthewheatleaftissuebysemi—quantitativeRT—PCR．Inthisstudy，theresistancehomo— logysequencewereobtained inTcLr35，whichprovidehteshortcutforcloningofwheatleafrustresistance geneLr35． Keywords：wheatleafrustresistancegene；rapidamplificationcDNAends(RACE)；homologysequence 中图分类号：$435．121．43 文献标识码 ：A 文章编号：04124)914(2009)054)507-07 小麦 (TriticumaestivumL．)是世界范 围内重 因的克隆对于培育抗病作物品种和研究病原物与 要的粮食作物。小麦叶锈病是 由专性寄生真菌小 寄主之间相互作用机制具有重要意义。 目前，人们 麦叶锈菌(Pucciniatriticina)引起的最严重的小麦 已经从玉米、拟南芥、水稻、小麦、大麦等植物