右归丸对骨髓抑制小鼠造血功能的影响.docVIP

　　右归丸对骨髓抑制小鼠造血功能的影响 作者：郑轶峰 张力华 秦剑 石娅萍 周毅 【摘要】 目的：观察右归丸对骨髓抑制小鼠外周血、造血干细胞增殖能力、骨髓细胞周期和凋亡的影响，并探讨其可能作用机制。方法：小鼠48只，随机分为正常组、模型组，右归丸低、中、高剂量组和阳性对照组，每组8只。除正常组外，余五组均予造模，连续3天给予腹腔注射环磷酰胺制备骨髓抑制模型。造模后各组应用相应药物 治疗 7天。用全自动血细胞分析仪、白细胞计数法、造血祖细胞培养和流式细胞术(FCM)分别检测右归丸对骨髓抑制小鼠外周血、骨髓有核细胞数、体外培养各系造血祖细胞的集落数以及骨髓细胞周期和凋亡的影响。结果：右归丸中、高剂量均能明显升高外周血红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、骨髓有核细胞(BMC)数，高剂量对血小板(PLT)和白细胞(期细胞的转化，提高G2/M期细胞比例，增殖指数(PI)明显升高。右归丸中、低剂量组的骨髓细胞凋亡比例显著下降。结论：右归丸可能通过促进G0期造血干细胞进入细胞周期，进行增殖；加速骨髓细胞修复受损的DNA，通过G1/S和S期监测点；抑制造血细胞的凋亡；调节造血细胞增殖与凋亡之间的平衡等机制，从而促进损伤骨髓造血功能恢复。 【关键词】 小鼠 骨髓抑制 右归丸 细胞周期 凋亡 细胞培养 右归丸出自明代张景岳的《景岳全书》，由熟地、制附子、肉桂、山药、山茱萸、菟丝子、枸杞、鹿角胶、杜仲、当归等药组成，为温补肾阳的代表方剂，具温补肾阳、填精益髓之功效。本研究采用60Co伽马射线和环磷酰胺(CTX)联合制作骨髓抑制小鼠模型，观察右归丸对骨髓抑制小鼠外周血细胞、骨髓有核细胞数、造血干细胞增殖能力、骨髓细胞周期及细胞凋亡的影响，为其在临床上的进一步应用提供理论依据。 1 材料和方法 1．1 材 料 8～12 周龄BALB／c纯系雄性小鼠48只，体质量18～22g(四川大学实验动物中心提供，实验动物许可证号：川实动管字09号)；右归丸(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，批号：8013042)，使用前用生理盐水配制成相应浓度的溶液；环磷酰胺（山西普德药业有限公司，批号；重组人粒细胞集落刺激因子注射液(特尔津，厦门特宝生物工程股份有限公司，批号：200807820)；碘化丙啶(PI)荧光染液(美国Sigma公司)；60Coγ射线放射源(四川省肿瘤 医院 放疗科提供)；全自动血细胞分析仪BC3000 Plus型(深圳迈瑞生物医疗 电子 股份有限公司)；流式细胞仪(EPICS XL型，BeckmanCoulter公司)。 1.2 方 法 1．2．1 骨髓抑制动物模型的制备 参照严苏纯[1]等介绍的方法造模。小鼠经2.0Gy的60Co照射后第4天开始，每天腹腔注射环磷酰胺(CTX)50mg/kg(于临用前配制)，连续给药3天完成模型制备。 1.2.2 动物分组与给药 将小鼠随机分为正常组，模型组，右归丸低、中、高剂量组和阳性对照组，每组8只。除正常组外，其余五组均进行造模。小鼠造模完成的第2天开始给药，正常组和模型组每只灌胃0．2 ml/（10g·d）的生理盐水；右归丸低、中和高剂量组分别给右归丸浓度为2.25g/kg、4.5g/kg和9.0g/kg，每只小鼠灌胃0.2 ml／(10g·d)；阳性对照组每天腹腔注射重组人粒细胞集落刺激因子(GCSF)150μg/kg，共给药7天。 1.2.3 外周血细胞计数 最后一次给药后24小时，经小鼠眼球后静脉丛采血0．1 ml，用BC3000 Plus型全自动血细胞分析仪进行血常规检测。 1.2.4 骨髓有核细胞悬液的制备 最后一次给药后24小时，以颈椎脱臼法处死各组小鼠，取出股骨，剔除肌肉和结缔组织，剪开股骨两端，用6号针头以生理盐水液冲出骨髓细胞，再用4号针头过滤制成单个骨髓细胞悬液。取部分骨髓细胞悬液在显微镜下按白细胞计数法进行骨髓有核细胞计数。 1.2.5 造血祖细胞培养 在最后一次给药后24小时，颈椎脱臼处死各组小鼠，75％酒精浸泡消毒，无菌条件下取出股骨， 参考 　　2．3 对骨髓抑制小鼠骨髓细胞周期和凋亡的影响 与模型组比较，其余各组G0/G1期细胞比例均有不同程度降低，除中剂量组外，差异均有显著性意义(Plt;0．05)。各组S期细胞比例高于正常组，除模型组和中剂量组外，其余各组均有统计学差异；除右归丸中剂量组外，各药物组S期细胞比例高于模型组(Plt;0．01)。各组G2／M期细胞比例均低于正常组(Plt;0．01)，各药物组G2/M期细胞比例均高于模型组(Plt;0．01)。 除中剂量组外， 各药物组增殖指数与模型组比较均有所提高， 且有统计学意义(Plt;0．01)。 与正常组比较， 各组凋亡细胞比例明显升高(Plt;