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维普资讯 林业科学研究 2004，17(6)：700～705 ForestResearch 文章编号：1001—1498(2(104)06-0700-06 杨山牡丹和牡丹种间杂交后代的 DNA分子证据 索志立 ，周世良，张会金 ，张治明 (1．中国科学院植物研究所，北京 lOO(O3；2．中国科学院植物研究所系统与进化植物学开放实验室，北京 lO(]o93) 摘要：以杨山牡丹作母本，分别以牡丹品种 赵‘粉’( Slfflll~osa?mdr．CV．Z‘haoFen’)和 紫‘二乔’ (P．s oCV．‘ErQiao’)作父本，进行人工杂交，获得了杂交后代。利用DNAISSR标记技术构 建的亲子代DNA指纹图谱显示，在杂交后代中检测到了分别来自双亲的特征带。建立起来的专用于 牡丹研究的ISSR标记技术方法可以用于牡丹杂交种的苗期快速鉴定 关键词：杨山牡丹；牡丹；杂交；ISSR标记；DNA指纹图谱；品种鉴定 中图分类号：$682．1 文献标识码：A 杨山牡丹(PaeoniaostiiT．HongetJ．X．Zhang)由洪涛等¨于 1992年首次发表，为芍药科 (Paeoniaceae)芍药属(PaeoniaL．)牡丹组(SectionMoutanDC)革质花盘亚组(Subsect．Vag,~ F．C．Stem)的落叶亚灌木，是中国栽培牡丹品种的近缘野生种之一 。中国牡丹的起源和 演化一直是研究的热点_4 。邹喻苹等 利用随机引物扩增DNA多态性(RAPD)标记的分析 结果显示杨山牡丹与紫斑牡丹(P．rockii(S．G．HawetL．A．I_auener)T．HongetJ．J．Li)、卵叶牡 丹(P．qiuiY．L．PeietHong)、四川牡丹(P．decorr~sitaHand．．Mazz．)、延安牡丹(P．yartane~s／ T．HongetM．R．Li)以及矮牡丹(P．js／hanenss／T．HongetW．Z．Zhao)亲缘关系较近，推测这几个 野生种同步于革质花盘亚组，可能都参与了中国栽培牡丹品种的起源4仉佗叫·。花粉形态 特征也支持杨山牡丹是中国牡丹栽培品种的主要起源种之一 1埔。利用RAPD分子标记技术 对牡丹组野生种和品种的研究规模都相对较小，虽然揭示了一些规律，但多数研究仍局限于实 验条件及研究方法的探索阶段 】 。微卫星序列为短串联重复DNA序列，是几个碱基对(一 般为1～5个)的一个重复片段，如(CA) (GAG) (GACA)等，称为简单重复序列(SimpleSe． quenceRepeats，简称SSR)。在真核生物的整个基因组中广泛存在。根据微卫星序列设计引 物，直接PCR扩增微卫星位点之间的区域，检测遗传多态性的分子标记技术称为ISSR(Inter． simplesequencerepeat)标记技术。ISSR标记是继RAPD标记之后出现的一种新的DNA分子标 记，具有稳定性较好的特点。近年来，在国际上已广泛应用于物种及栽培品种的起源、演化、亲 缘关系以及分子标记辅助育种等方面的研究 __．一。笔者以杨山牡丹作母本，以牡丹品种 赵‘ 收稿日期：2004-03—10 基金项目：中国科学院资助项目(Kscx2一sw-108) 作者简介：索志立(19 一)，男。博士。主要从事植物遗传育种学、园艺植物学以及系统与进化植物学研究 维普资讯 第6期 索志立等：杨山牡丹和牡丹种间杂交后代的DNA分子证据 701 粉’(P．suffrttticosaAndr．CV．Z‘haoFen’)和 紫‘二乔’(P．suffntticosaCV．Z‘iErQiao’)作父本 (舍)，进行人工杂交，并利用ISSR标记技术对亲子代进行鉴定，目的在于：(1)为杨山牡丹起源 中国栽培牡丹品种的途径的存在寻找DNA分子证据；(2)为牡丹品种的苗期快速鉴定以及为 牡丹的种和种下水平的分类及系谱关系的研究探索新的DNA分子标记方法。 1材料与方法 1．1供试材料与杨山牡丹后代的获得 如表1所示，以中国科学院植物研究所北京植物园引自